新規E3ユビキチンリガーゼファミリーによるトラフィック制御機構の解明

新型 E3 泛素连接酶家族阐明交通控制机制

• 批准号: 18050041
• 负责人: 石戸 聡
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18050041/
• 关键词: ユビキチン; B7-2; ユビキチンリガーゼ; 細胞内輪送; 蛋白分解; リソソーム; 抗原提示細胞; 免疫制御; エンドサイトーシス; MHC class II; MHC class I

本期間にて、新規E3ユビキチンリガーゼファミリーメンバーであるc-MIRによる細胞内輸送機構を詳細に検討した。まず、c-MIRがドキシサイクリン(Dox)にて誘導的に発現出来る細胞T-REx-c-MIRを作成した。この細胞にて、Dox添加、約4時間後にc-MIRの発現を観察する事が出来る。さらに、ユビキチン化をモニターするためにFLAGタグを挿入したCD8キメラ分子をT-REx-c-MIR細胞に導入した。この標的分子はFLAG抗体にて精製し、生化学的解析を行う事が出来る。さらに、細胞表面におけるイベントを詳細に検討するため、細胞表面をビオチン化し解析を行った。その結果、Dox添加後、約4時間で表面に存在していたCD8キメラ分子がユビキチン化される事が明らかとなった。さらに、ユビキチン化が表面において誘導され、internalizationのシグナルとなりうるのかを、クロルプロマジン(CPZ)にてinternalizationを抑制する事にて検討した。CPZ処理にて細胞表面のユビキチン化されたキメラ分子は集積し、分解が抑制された。キメラ分子の細胞内領域リジン残基に変異を導入したユビキチン化を受けない分子はinternalizeされなかった。最終的に、T-REx-c-MIRにsiRNAを用いて、E2酵素がUBCH5b/cである事を同定し、細胞表面におけるユビキチン化を抑制した結果、CD8キメラ分子はinternalizationされなかった。これらの結果から、c-MIRによる標的分子の抑制は、細胞表面におけるユビキチン化を誘導し、internalizationを誘起する事により起っている事が明らかとなった。この結果は2008年のPLoS ONEに掲載された。

This period, the new regulation E3, the intracellular transport mechanism is discussed in detail T-REx-c-MIR is produced in cells induced by Dox. After 4 hours, c-MIR was detected. In addition, the FLAG gene was introduced into T-REx-C-MIR cells. The target molecule is FLAG antibody purification, biochemical analysis and implementation. The cell surface is analyzed in detail. As a result, after Dox addition, about 4 times, the surface exists. In addition to the above, the paper also discusses the control of internalization in the process of surface induction and internalization. CPZ treatment inhibits the aggregation and decomposition of molecules on the cell surface. The intracellular domain of the molecule is transformed into a molecular domain. Finally, T-REx-c-MIR siRNAs were used, E2 enzymes were identified, cell surface proteins were inhibited, CD8 molecules were internalized. As a result, the inhibition of c-MIR target molecules, the induction of c-MIR on cell surfaces, and the initiation of internalization are all important factors. The results were published in PLoS ONE in 2008.

项目成果

Non-structural protein 4A of Hepatitis C virus accumulates on mitochondria and renders the cells prone to undergoing mitochondria-mediated apoptosis

• DOI: 10.1099/vir.0.81701-0
• 发表时间: 2006-07-01
• 期刊: JOURNAL OF GENERAL VIROLOGY
• 影响因子: 3.8
• 作者: Nomura-Takigawa, Yuki;Nagano-Fujii, Motoko;Hotta, Hak
• 通讯作者: Hotta, Hak

An excellent monitoring system for surface ubiquitination-induced internalization in mammals.

• DOI: 10.1371/journal.pone.0001490
• 发表时间: 2008-01-30
• 期刊: PloS one
• 影响因子: 3.7
• 作者: Goto E;Mito-Yoshida M;Uematsu M;Aoki M;Matsuki Y;Ohmura-Hoshino M;Hotta H;Miyagishi M;Ishido S
• 通讯作者: Ishido S

c-MIRを利用したCD40の発現調節、及びそのスクリーニング方法

c-MIR的CD40表达调控及其筛选方法

• 发表时间: 2007

樹状細胞の分化に重要な役割を持つMARCEH-I分子

MARCEH-I分子在树突状细胞分化中发挥重要作用

• 发表时间: 2007
• 作者: Nomura-Takigawa;Y.;Nagano-Fujii;M.;Deng;L.;Kitazawa;S.;Ishido.S.;Sada;K.;Hotta;H.;後藤 栄治;石戸 聡;星野 真理
• 通讯作者: 星野 真理

カポジ肉腫関連ヘルペスウイルスMIR1,2の哺乳類相同分子の同定

卡波西肉瘤相关疱疹病毒 MIR1,2 的哺乳动物同源物的鉴定

• 发表时间: 2007
• 作者: 石戸 聡;後藤 栄治;水戸 麻理;青木 雅美;松木 洋平;星野 真理;植松 未香
• 通讯作者: 植松 未香