生体内シグナル伝達分子を標的とした蛍光バイオセンサーの創製

创建针对体内信号转导分子的荧光生物传感器

• 批准号: 19021023
• 负责人: 森井 孝
• 金额: $ 3.07万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19021023/
• 关键词: バイオセンサー; 蛍光プローブ; リン酸化チロシン; RNA; ペプチド; リボヌクレオペプチド; インビトロ・セレクション; リン酸化アミノ酸; アミノ酸配列特異的リン酸化

(1) 二種類の標的分子を同時計測できるデュアルバイオセンサーの構築異なった波長で応答する二種類のバイオセンサーを使用する事により、二元同時センサーを作製した。Cy5をN末端に導入したペプチドを用いて作製した光応答性ATPリセプターライブラリーから、効率よく光応答する蛍光性センサーを得た。GTPに対しても同様に、フルオレセインを導入した光応答性GTPリセプターライブラリーから光応答するセンサーを選出した。得られたリボヌクレオペプチドセンサーのRNAサブユニット3'末端を参加し、蛍光性RevペプチドのC末端に導入したヒドラジド基と反応させることにより、共有結合で連結された蛍光性RNPセンサーを合成した。異なった波長で応答するATPセンサーとGTPセンサーを同時に用いることにより、ATPとGTPを同時に計測できる二元同時センサーの作製に成功した。異なった波長で応答する二種類のバイオセンサーを使用する事により、二元同時センサーを作製した。Cy5をN末端に導入したペプチドを用いて作製した光応答性ATPリセプターライブラリーから、効率よく光応答する蛍光性センサーを得た。GTPに対しても同様に、フルオレセインを導入した光応答性GTPリセプターライブラリーから光応答するセンサーを選出した。得られたリボヌクレオペプチドセンサーのRNAサブユニット3'末端を参加し、蛍光性RevペプチドのC末端に導入したヒドラジド基と反応させることにより、共有結合で連結された蛍光性RNPセンサーを合成した。異なった波長で応答するATPセンサーとGTPセンサーを同時に用いることにより、ATPとGTPを同時に計測できる二元同時センサーの作製に成功した。(2) 細胞抽出液中でのセンシング上記(2)で合成した共有結合性ATPセンサーとGTPセンサーは、ヌクレアーゼ耐性が向上した。それぞれのセンサーは、細胞抽出液中でも効率よくATPもしくはGTPを検出・定量する事が可能であった。(3) 細胞内イノシトール四リン酸動態のリアルタイム計測天然タンパク質を基にIP4に対する蛍光性センサーを構築し、試験管内および細胞内においてIP4濃度変化の検出に成功した。また、IP4センサーとカルシウムセンサーfura-2を同時に用いて、IP4とCa2+挙動の単一細胞内リアルタイム検出に成功した。

(1)Two types of target molecules can be measured simultaneously, so that two types of mobile stations can be used with different wavelengths built into the mobile station. This means that dual simultaneous mobile stations can be implemented. Cy5-terminal optical fiber The GTP is the same as the GTP and the GTP is the same as the GTP. The 3'terminal end of the RNA fragment was incorporated into the 3' terminal end of the RNA fragment, and the 3'terminal end of the RNA fragment was incorporated into the 3' terminal end of the RNA fragment. ATP and GTP simultaneous measurement of different wavelengths Two kinds of different wavelengths can be used to control different kinds of different wavelengths. Cy5-terminal optical fiber The GTP is the same as the GTP and the GTP is the same as the GTP. The 3'terminal end of the RNA fragment was incorporated into the 3' terminal end of the RNA fragment, and the 3'terminal end of the RNA fragment was incorporated into the 3' terminal end of the RNA fragment. ATP and GTP simultaneous measurement of different wavelengths (2)In the cell extract, there is a combination of ATP and GTP, and a combination of ATP and GTP. In addition, the cell extract can be used to detect ATP and GTP. (3)Measurement of intracellular IP4 activity and detection of IP4 concentration in cells IP4 and Ca2 + were successfully used in single cell recovery.

项目成果

Charge-Pairing Mechanism of Phosphorylation Effect upon Amyloid Fibrillation of Human Tau Core Peptide

• DOI: 10.1021/bi8010994
• 发表时间: 2008-11-11
• 期刊: BIOCHEMISTRY
• 影响因子: 2.9
• 作者: Inoue, Masafumi;Hirata, Akiyoshi;Konno, Takashi
• 通讯作者: Konno, Takashi

Design of Ribonucleopeptide-based Receptors and Fluorescent Sensors

基于核糖核酸肽的受体和荧光传感器的设计

• 发表时间: 2008
• 作者: YAMAMOTO Hiroyuki、Hau;Caroline S. & Kasian Tejapira;T. Morii
• 通讯作者: T. Morii

Amyloid-forming propensity of the hydrophobic non-natural amino acid on the fibril-forming core peptide of human tau

• DOI: 10.1016/j.bmcl.2007.03.071
• 发表时间: 2007-06-01
• 期刊: BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS
• 影响因子: 2.7
• 作者: Hirata, Akiyoshi;Sugimoto, Kenji;Morii, Takashi
• 通讯作者: Morii, Takashi

Context-dependent fluorescence detection of aphosphorylated tyrosine residue by aribonucleopeptide.

通过 aribonucleopeptide 对非磷酸化酪氨酸残基进行背景依赖性荧光检测。

• 发表时间: 2008
• 期刊: J.Am.Chem.Soc. 130
• 作者: Hasegawa;T.;Hagiwara;M.;Fukuda;M.,Nakano;S.;Fujieda;N.;Morii;T.
• 通讯作者: T.

"A Modular Strategy for Development of RNA-Based Fluorescent Sensors" in Combinatorial Methods for Chemical and Biological Sensors (R. A. Potyrailo, V. M. Mirsky (eds.)

化学和生物传感器组合方法中的“开发基于 RNA 的荧光传感器的模块化策略”（R. A. Potyrailo、V. M. Mirsky（编辑））

• 发表时间: 2009
• 作者: Arakawa;et. al.;T. Morii
• 通讯作者: T. Morii