機能性ミニチュアRNAタンパク質複合体の構築

功能性微型RNA-蛋白质复合物的构建

• 批准号: 14035226
• 负责人: 森井 孝
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14035226/
• 关键词: タンパク質デザイン; RNA-タンパク質複合体; ライブラリー; in vitroセレクション; リセプター; ファージ・ディスプレイ

本年度の研究ではRNA・ペプチドサブユニット間、およびサブユニット・基質間の相互作用様式を基質の結合に協同的に働くように設計したRNA・ペプチドサブユニットから形成される機能性RNA・ペプチド複合体の設計と構築を行った。リボヌクレオペプチド・リセプターはRNAをライブラリー化することによる機能化と、ペプチドサブユニットをライブラリー化することによる機能化の二つの機能化方法を同時または順次適用することが出来る。今回、ペプチドライブラリーを新たに作製してリボヌクレオペプチド・ライブラリーを作成し、ATP結合性リボヌクレオペプチド・リセプターのATP選択性を向上させることを目的とした。RevペプチドのN末端にランダム化した7アミノ酸を導入し、ファージディスプレイを作製した。7アミノ酸領域はS-S結合を形成することによりλファージのtail capsidに発現され、ループ構造をとることができる。このファージとRNAとの複合体を用いて、ATP/AMP選択性を上げることを指標にしてスクリーニングを行った。Revペプチドを用いたリボヌクレオペプチド・ライブラリーのin vitro selectionから得られたRNA配列(UCUCGU-GUGUA-UGGGG-UA-UG-CU-GCGUUGG)を用いた場合、ランダムアミノ酸配列はFTPRDADに代表される類似配列が得られた。これらを用いたリボヌクレオペプチド複合体のATP結合活性はRevペプチドからなるリボヌクレオペプチド複合体と同等のものであったが、AMPに対する選択性およびdATPに対する選択性ははるかに高いものであった。この結果から、ペプチド・ライブラリーを用いることにより、リボヌクレオペプチド・リセプターの高機能化が行えることが明らかになった。

今年的研究设计并构建了由RNA肽亚基和RNA肽亚基形成的功能性RNA肽复合物，这些肽的相互作用模式与RNA肽亚基和亚基 - 覆盖物相互作用之间的相互作用模式之间的相互作用模式。核糖核苷酸受体可以同时或顺序应用：通过库中的RNA和功能化来通过库中的肽亚基来进行功能化。这次，创建了一个新的肽库来创建一个核糖核肽库，其目的是提高ATP结合核糖核肽受体的ATP选择性。在Rev肽的N末端引入了7个随机氨基酸，以产生噬菌体显示。 7-氨基酸区域通过形成s-s键在λ噬菌体的尾部帽上表达，并且可以采用环结构。这种噬菌体和RNA的复合物用于使用提高ATP/AMP选择性的指数进行筛选。当使用REV肽的核糖核肽库中获得RNA序列（Ucucgu-Gugua-ugggg-ua-ua-ua-ua-ua-ugggg-ua-ug-ug-gcguugg）时，使用REV肽的体外选择，使用REV肽，以FTPRDAD代表的类似序列是ftprdad代表的随机氨基酸序列。尽管使用它们的核糖核肽复合物的ATP结合活性与由Rev肽组成的核糖核苷酸络合物复合物的ATP结合活性相当，但AMP和DATP的选择性更高。这些结果表明，使用肽文库可以增强核糖核苷受体的功能。

项目成果

T.Morii: "Functional Reassembly of a Split PH Domain"J. Am. Chem. Soc.. 124(in press). (2003)

T.Morii：“拆分 PH 结构域的功能重组”J。

T.Morii: "In Vitro Selection of ATP-binding Receptors Using a Ribonucleopeptide Complex"J. Am. Chem. Soc.. 124. 4617-4622 (2002)

T.Morii：“使用核糖核酸肽复合物体外选择 ATP 结合受体”J。

T.Morii: "A New Fluorescent Biosensor for Inositol Trisphosphate"J. Am. Chem. Soc.. 124. 1139-1140 (2002)

T.Morii：“一种新型肌醇三磷酸荧光生物传感器”J。

T.Morii: "Chemical Approach to Untangle the Sequence-Specific DNA Binding by Proteins"Chem-Eur. J.. 22. 5067-5071 (2002)

T.Morii：“解开蛋白质序列特异性 DNA 结合的化学方法”Chem-Eur。

T.Morii: "Structure-Based Design of a Leucine Zipper Protein with New DNA Contacting Region"Biochemistry. 41. 2177-2183 (2002)

T.Morii：“具有新 DNA 接触区域的亮氨酸拉链蛋白的基于结构的设计”生物化学。