非共有結合により四次構造を形成する人工DNA結合タンパク質の構築とその機能解析

通过非共价键形成四级结构的人工DNA结合蛋白的构建及其功能分析

• 批准号: 07229225
• 负责人: 森井 孝
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 1996
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07229225/
• 关键词: DNA; オリゴペプチド; 分子認識; ホストーゲスト; 二量体; シクロデキストリン; ロイシンジッパー; 協同性

DNA認識モチーフペプチドとしてロイシンジッパータンパク質GCN4、EMBP1およびC/EBPのDNA結合部位に由来するオリゴペプチドを固相法により合成し、ペプチドをゲスト化合物アダマンタン、およびβ-シクロデキストリンで修飾したペプチドをそれぞれ合成する事により、DNA結合部位のアミノ酸配列がことなり、包接化合物形成能、即ち二量化能の同一なホストーペプチドtゲストーペプチドを得ることができた。得られたオリゴペプチドとDNAの塩基配列特異的な結合を放射性同位元素で標識した短鎖オリゴヌクレオチドを用いてゲルシフトアッセイやフットプリンティングを行う事により評価したところ、同種のペプチドをホスト分子及びゲスト分子で修飾して用いた場合には回文配列DNAが選択的に認識できることがわかった。また、二種類のペプチドをそれぞれホスト分子およびゲスト分子で修飾した場合には、両ペプチドは協同的に二重体を形成しながら非回文配列DNAに選択的に結合することがわかった。天然のGCN4では5^1-ATGACGTCAT‐3^1という配列を認識するが、上記の方法で、異なったアミノ酸配列を持つペプチドを組み合わせると、5^1-ATTGCTCAT‐3^1のような、非回文配列を認識することができる。また、これらの非共有結合で二量化するペプチドは特定のDNA塩基配列に結合したときにのみ、αヘリックスを形成していることがわかった。

DNA recognition, DNA binding site, DNA binding site That is, the two quantization functions are the same. In order to obtain the DNA base alignment specific binding, radioactive isoelement identification, use, and evaluation of the DNA base alignment specific binding, isoelement identification, molecular modification, and use, the DNA base alignment specific binding, radioactive isoelement identification, and use, the DNA base alignment specific binding, and the DNA base alignment specific binding. In addition, the two kinds of DNA molecules are modified to form a double body with non-palindromic alignment DNA. Natural GCN4 is recognized by the 5^1-ATGACGTCAT-3^1 and non-palindromic alignment. The two types of non-consensus binding are the same as those of the other types of DNA binding.

项目成果

Takashi Morii: "Sequence-specific DNA recognition by peptide heterodimers" Nucleic Acids Symposium Series. 34. 141-142 (1995)

Takashi Morii：“肽异二聚体的序列特异性 DNA 识别”核酸研讨会系列。

森井 孝: "DNAとタンパク質の相互作用を探る-どのように相手を認識し、機能するのか-" 現代化学. 5月号. 26-31 (1995)

Takashi Morii：“探索 DNA 和蛋白质之间的相互作用 - 它们如何识别彼此并发挥作用？”Gendai Kagaku 5 月号。

Takashi Morii: "DNA recognition by peptide oligomers" Nucleic Acids Symposium Series. 34. 143-144 (1995)

Takashi Morii：“肽寡聚物的 DNA 识别”核酸研讨会系列。

Takashi Morii: "Sequence-Specific DNA Binding by Covalently Constrained Peptide Dimers of the Basic Leucine Zipper Protein GCN4" Bioorganic and Medicinal Chemistry. 3. 777-784 (1995)

Takashi Morii：“基本亮氨酸拉链蛋白 GCN4 的共价约束肽二聚体的序列特异性 DNA 结合”生物有机和药物化学。

森井 孝: "金属錯体による核酸構造の認識" 化学総説. 24. 216-227 (1995)

Takashi Morii：“使用金属配合物识别核酸结构”《化学评论》24. 216-227 (1995)。