ミオシンモーターの細胞内ナノシステムの構築と制御

肌球蛋白运动细胞内纳米系统的构建与控制

基本信息

批准号：
19037018
负责人：
祐村恵彦
金额：
$ 3.78万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19037018/
关键词：
ミオシンナノシステム GFP 細胞運動繊維

项目摘要

ミオシン繊維の動態と繊維化の解析EGFPミオシンを発現させた細胞で、全反射蛍光顕微鏡によって細胞腹側の細胞膜近傍のミオシン繊維の挙動を高感度カメラにより画像取得し、細胞運動に伴う挙動を解析した。ミオシンの繊維化、脱繊維化がどのように起きるのか、また、個々のミオシン繊維がどのように細胞の尾部や分裂面に集まるかを画像化し解析した。ミオシン遺伝子の改変による細胞内構築の解析ミオシンが細胞尾部に集合するのに、ミオシンのモーター活性が必要かどうかを調べるため、ミオシンのモータードメイン内の点突然変異によりモーター活性のないミオシンを形質導入し、細胞尾部に集まるかどうかを調べたところ、モーター活性がなくとも集合できることが分かった。また、ミオシンはリン酸化の制御を受けるので、リン酸化できないようなミオシンで細胞尾部に集まるかどうかを調べた。また、これらの変異ミオシンにGFP標識を行い、細胞内での集合の様子を直接観察したところ、ターンオーバーはリン酸化とモーター活性の両者に依存することが分かった。ミオシン繊維から細胞の力の出力までミオシン繊維から細胞の力の出力までを観察するために、細胞内のミオシン繊維を観察すると同時に、細胞の出す力を計測した。細胞の出す力を計測する方法としては、最近新しく開発したEvanescence-Force Microscopeを用いた。ミオシンの集合時に確かに細胞の力が発生していることが分かった。ミオシンの集合の細胞内シグナルの解明 : PTENがミオシンの上位シグナルであることを新たに見いだした。

对表达EGFP肌球蛋白的细胞中肌球蛋白纤维动力学和纤维化的分析，使用高敏感摄像头与细胞膜在细胞腹侧的附近使用总反射荧光显微镜在细胞的腹侧的附近获取，并分析了与细胞运动相关的行为。我们成像并分析了肌球蛋白纤维和去纤维化的发生方式，以及单个肌球蛋白纤维如何聚集在细胞的尾部和分裂表面。通过改变肌球蛋白基因来分析细胞内结构，以确定肌球蛋白是否需要在细胞尾部组装肌球蛋白运动活动，我们通过肌球蛋白运动域的点突变进行了肌球蛋白，没有运动活动，并检查了它是否在细胞尾部收集，并发现它也可以在没有运动活动的情况下收集。此外，由于肌球蛋白受磷酸化的控制，因此我们研究了无法磷酸化的肌球蛋白在细胞尾部收集。此外，当在这些突变体肌球蛋白上加上GFP标记时，我们直接观察到细胞内的组件状况，发现周转率取决于磷酸化和运动活性。为了观察肌球蛋白纤维的输出到细胞力的输出，从肌球蛋白纤维的输出到细胞力的输出，我们观察到细胞中的肌球蛋白纤维，并测量细胞发出的力。一种测量细胞产生的力的方法是最近新开发的逃生 - 磨性显微镜。发现在肌球蛋白组装过程中确实产生了细胞力。阐明肌球蛋白组件的细胞内信号：我们新发现的PTEN是肌球蛋白的出色信号。