ミオシンモーターの細胞内ナノシステムと走化性運動

细胞内纳米系统和肌球蛋白运动的趋化运动

基本信息

批准号：
17049020
负责人：
祐村恵彦
金额：
$ 4.1万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17049020/
关键词：
ミオシンナノシステム GFP 細胞骨格繊維細胞運動ナノバイオ走化性

项目摘要

(1)全反射蛍光顕微鏡による個々のミオシン繊維の挙動の解析 :全反射蛍光顕微鏡によって、細胞膜側の細胞膜近傍のGFPミオシン繊維の挙動を高感度カメラにより画像取得し、走化性細胞運動に伴う構築変化を解析した。仮足の収縮時に繊維が集まることが明らかになった。(2)ミオシン遺伝子の改変による細胞内構築の解析:ミオシンのモーター活性、リン酸化の制御が、ミオシンが細胞尾部に集合するのに必要かどうかを、遺伝子を改変して調べた。モーター活性をもたないミオシンや、リン酸化できないミオシンでも仮足に新たに集合できることからこの集合にはこれらの制御を受けないことが明らかになった。(3)ミオシン繊維から細胞の力の出力まで:細胞内のミオシン繊維を観察すると同時に、細胞の出す力を計測した。力の計測は、最近我々が開発したシリコンオイル膜を用いる方法でおこなった。仮足の収縮時にミオシンが集合するタイミングで力が発生していることが明らかになった。(4)ミオシンリン酸化酵素の動態:4つのミオシン重鎖リン酸化酵素をGFP標識し、細胞内の動態を調べた。そのうち、MHCKC, Bは細胞の尾部でミオシン繊維と結合していることがわかった。(5)細胞尾部へのミオシンの集合細胞内シグナルの解明:走化性物質が細胞膜のレセプターに結合してからミオシンが細胞尾部に集合するまでの細胞内シグナル経路のうち、特にPTENの関与が明らかになってきた。

（1）使用总反射荧光显微镜对单个肌球蛋白纤维的行为进行分析：使用总反射荧光显微镜，使用高敏感摄像头在细胞膜侧获得细胞膜附近的GFP肌球蛋白纤维的行为，以分析与体形细胞运动相关的构造变化。据透露，当假腿收缩时，纤维会聚集。（2）通过改变肌球蛋白基因来分析细胞内结构：我们研究了肌球蛋白运动活性和磷酸化的控制是否是肌球蛋白通过改变基因来在细胞尾部组装的。据揭示，即使没有无法磷酸化的运动活性或肌球蛋白的肌球蛋白也可以在伪虫中新组装，这表明这些聚集不会受到这些控制。（3）从肌球蛋白纤维到细胞力输出：同时，在观察细胞内的肌球蛋白纤维时测量了细胞力输出。该力是使用我们最近开发的硅油膜测量的。据揭示，当肌球蛋白在假肢收缩期间收集时产生力。（4）肌球蛋白磷酸化酶的动力学：用GFP标记了四种肌球蛋白重链磷酸化酶，并检查了细胞内动力学。其中，发现MHCKC和B与细胞尾部的肌球蛋白纤维结合。（5）肌球蛋白在细胞尾部的组装：尤其是PTEN的参与已经从趋化性物质到细胞膜受体的结合到细胞膜的受体到肌球蛋白在细胞尾部上升。