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生細胞内直視実験系による収縮環形成時のミオシンの動的構築機構解析

利用活细胞直接观察实验系统分析收缩环形成过程中肌球蛋白的动态组装机制

基本信息

批准号：
08259208
负责人：
祐村恵彦
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08259208/
关键词：
ミオシン収縮環 ATP 細胞性粒菌

项目摘要

1)収縮環形成時のミオシン繊維の動的構築の観察。ミオシン繊維を生きた細胞内で観察するため、蛍光標識粘菌ミオシンをエレクトロポレーション法で細胞内に導入した。低温下に細胞を置くことで、ミオシン繊維の運動速度を下げて超高感度カメラにより観察した。細胞分裂時にミオシン繊維が収縮環に集まる際の素過程をはじめて観察した。2)ケージド蛍光色素標識によるミオシン分子の収縮環部位でのターンオーバー速度の解析。ケージド蛍光色素標識したミオシンを細胞内に導入し、細胞の一部に解除光を照射して、その部位に存在するケージド蛍光色素を解除し、その蛍光の拡散速度からミオシン分子のターンオーバー速度や分子の運動速度を計測することを試みるため、ケージド蛍光色素標識の条件を決定しようとしたが、ミオシンのATPase活性が失われてしまうため、標識試薬の選択から検討すべきである。ケージド蛍光色素標識したBSAは対象実験として導入に成功した。BSAは1-2秒で細胞内を拡散移動できることがわかった。3)ミオシンのリン酸化部位改変による細胞質分裂機構の解析。ミオシンのリン酸化部位をリン酸化されないアラニンに改変した遺伝子をミオシンを欠損する細胞に導入した変異細胞を用いた。これらの変異細胞のすべてで細胞質分裂の際にミオシンが収縮環を形成した。この発見は、従来の仮説に矛盾する結果となった。4)セミインビトロ系を用いた実験系による収縮環へのミオシン局在化機構の検討。分裂時の細胞から細胞膜と収縮環の複合体を得た。これに含まれるミオシンのリン酸化の状態、またミオシンがATP処理で膜から放出される際のリン酸化の有無について調べた。

1) Observation of the structure of the dynamic state of the contraction ring during its formation. The method of intracellular introduction is to detect and identify the growth of myxomycetes. Under low temperature, the cell is placed in the middle of the body, and the movement speed of the cell is reduced. The process of cell division is observed during cell division. 2) Analysis of the velocity of the molecules in the condensed ring position of the pigment marker. The conditions for the introduction of the pigment into the cell, the removal of light from a part of the cell, the presence of the pigment, the dispersion of light from the cell, the measurement of the molecular velocity, and the measurement of the molecular motion velocity determine the conditions for the identification of the pigment, and the loss of ATPase activity. Select a logo for the test. The light pigment logo was successfully introduced into the image. BSA is 1-2 seconds long and moves within the cell. 3) Analysis of the cytokinesis mechanism in the modification of the acidification site of the cytokinesis. The cells in question were isolated from the cells in question. The formation of contractions during cytoplasmic division of these heterogeneous cells The result of this contradiction is that the two sides of the strait are facing each other. 4) A discussion of the application of the system in the field of chemical engineering. Cell membrane and contraction ring complexes are obtained during cell division. This includes the state of acidification and the presence or absence of acidification during ATP treatment.