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生細胞内直視実験系による細胞分裂、運動時のミオシンの動的構築機構解析

利用活细胞直接观察实验系统分析细胞分裂和运动过程中肌球蛋白的动态组装机制

基本信息

批准号：
07267209
负责人：
祐村恵彦
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07267209/
关键词：
細胞分裂ミオシン粘菌蛍光標識

项目摘要

1.細胞内に導入された蛍光標識ミオシンの挙動の解析。蛍光ラベルミオシンを細胞内に導入後、超高感度カメラでモニターし、画像解析処理して観察した。細胞運動時には、ミオシンは細胞の尾部に多く観察された。細胞が方向転換する時、ミオシンは細胞の一時的な停止に伴って、細胞の先端に集まり、方向転換後、新しい尾部に集積した。このことは、ミオシンが細胞の運動方向を制限する役割を担ってることを示唆するものである。細胞分裂時には、分裂溝へのミオシンの集積が見られた。この過程を詳細に観察することに成功した。ミオシンの分裂溝への集まる速度は、1-2分と非常に早いことがわかった。2.ミオシンの細胞内分布の定量的解析。細胞内には、ミオシンの除外される多くの膜系が存在しており、このため、外から見たミオシンの蛍光分布は真のミオシンの濃度の勾配を反映しない。そこで、細胞内に均一に広がるロ-ダミン標識BSAをミオシンと同時に導入させ、両者の蛍光比を画像処理して、細胞内分布の定量を行った。3.ミオシン繊維の動的構築の観察。繊維の重合、脱重合を行っている様子を生きた細胞内で観察するために、細胞の厚さを薄くして、個々の繊維を観察しやすい方法を検討した。その結果、恒常的ではないが、繊維像の観察に成功した。しかし、まだ、繊維の重合、脱重合過程は捕えられていない。低温処理して、ミオシンの運動性を下げることで観察が可能になると考えており、今後、研究を継続する予定である。4.蛍光標識アクチンとの2重導入。異なるで蛍光色素で標識したアクチンとミオシンを同時に細胞内に導入する条件の検討を行ったが、観察に十分耐える濃度の導入は現在の所成功していない。蛍光アクチン単独の導入には成功した。収縮環におけるアクチンの濃縮に関していくつかの新しい知見が得られた。

1. The intracellular input device is used to analyze the activity of the optical tag. After the introduction of intracellular light, the ultra-high sensitivity, the analysis of the portrait and the observation of the portrait. The tail of the cell should be monitored at the end of the cell during the operation. When the cell is in the right direction, the end of the cell is closed, the front end of the cell is closed, and after the direction is out, the tail of the new cell is closed. There are restrictions on the direction of movement of the workers, and the service cutting workers are required to show and abet the movement direction of the workers. When the cells are divided, and the cells are divided. During the process, you will be able to observe the success of your success. Please split the set, speed, 1-2 minutes, very early morning, good morning. two。 Quantitative analysis of intracellular distribution. With the exception of the intracellular and extracellular membrane systems, there is a reflection of the distribution of light in the membrane system. The homogenization of the sensor and the intracellular sensor-the label recognizes that the BSA sensor enters the image at the same time, the light is compared to the picture, and the intracellular distribution is quantified. 3. Please do not oversee the activities of the police. The method of superposition and de-coincidence is used for the detection of cell thickness, and so on. The result of the test, the constant observation of the success rate, and the observation of the success rate. In the process of coincident and de-coincident, the process of coincident and de-coincident is very important. Under the condition of low temperature and low temperature, it may be necessary to study the situation in the future. 4. The light tag does not need to be re-imported. The light pigment label is sensitive to the current success rate. At the same time, the intracellular loading conditions are sensitive, and the detection is very tolerant. Light, light, solo, success, success, success. I don't know what I know. I don't know what I know.