生細胞内直視実験系による細胞分裂、運動時のミオシンの動的構築機構解析

利用活细胞直接观察实验系统分析细胞分裂和运动过程中肌球蛋白的动态组装机制

• 批准号: 07267209
• 负责人: 祐村 恵彦
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07267209/
• 关键词: 細胞分裂; ミオシン; 粘菌; 蛍光標識

1.細胞内に導入された蛍光標識ミオシンの挙動の解析。蛍光ラベルミオシンを細胞内に導入後、超高感度カメラでモニターし、画像解析処理して観察した。細胞運動時には、ミオシンは細胞の尾部に多く観察された。細胞が方向転換する時、ミオシンは細胞の一時的な停止に伴って、細胞の先端に集まり、方向転換後、新しい尾部に集積した。このことは、ミオシンが細胞の運動方向を制限する役割を担ってることを示唆するものである。細胞分裂時には、分裂溝へのミオシンの集積が見られた。この過程を詳細に観察することに成功した。ミオシンの分裂溝への集まる速度は、1-2分と非常に早いことがわかった。2.ミオシンの細胞内分布の定量的解析。細胞内には、ミオシンの除外される多くの膜系が存在しており、このため、外から見たミオシンの蛍光分布は真のミオシンの濃度の勾配を反映しない。そこで、細胞内に均一に広がるロ-ダミン標識BSAをミオシンと同時に導入させ、両者の蛍光比を画像処理して、細胞内分布の定量を行った。3.ミオシン繊維の動的構築の観察。繊維の重合、脱重合を行っている様子を生きた細胞内で観察するために、細胞の厚さを薄くして、個々の繊維を観察しやすい方法を検討した。その結果、恒常的ではないが、繊維像の観察に成功した。しかし、まだ、繊維の重合、脱重合過程は捕えられていない。低温処理して、ミオシンの運動性を下げることで観察が可能になると考えており、今後、研究を継続する予定である。4.蛍光標識アクチンとの2重導入。異なるで蛍光色素で標識したアクチンとミオシンを同時に細胞内に導入する条件の検討を行ったが、観察に十分耐える濃度の導入は現在の所成功していない。蛍光アクチン単独の導入には成功した。収縮環におけるアクチンの濃縮に関していくつかの新しい知見が得られた。

1. Intracellular に introduction of された蛍 light markers シ シ <s:1> 挙 motion <e:1> analysis. After the 蛍 light ラベ ラベ ラベ <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> シ シ <s:1> シ シ is introduced into the を cells, ultra-high sensitivity カメラでモニタ <s:1> <e:1> <s:1>, image analysis and processing, て観 て観 examination, た. When cells are in motion, に に, シ シ, シ, シ, に, and the tail of the cell <s:1> is に and く観 observe された. , when cells が direction planning in す る ミ オ シ ン の a temporary な は cells stop に with っ て, cell の apex に set ま り, direction planning after the change, new し い tail に set product し た. こ の こ と は, ミ オ シ ン が cells の direction the limitations を す る "を cut bear っ て る こ と を in stopping す る も の で あ る. During cell division, に に, the cleavage へ, へ, へ, へ, シ, シ, and the accumulation of the colony が are found in られた. The process of <s:1> を detailed に観 check する とに success た た. The シ シ <s:1> split trench へ <s:1> まる set まる speed <e:1>, 1-2 minutes と very に early とがわ とがわ とがわ とがわ った. 2. Quantitative analysis of the intracellular distribution <e:1> of シ シ <s:1> cells. Intracellular に は, ミ オ シ ン except の さ れ る more く が の film system exist し て お り, こ の た め, outside か ら see た ミ オ シ ン の 蛍 は light distribution is の ミ オ シ ン の concentration の hook with を reflect し な い. そ こ で, intracellular に uniform に hiroo が る ロ - ダ ミ ン logo BSA を ミ オ シ ン と simultaneously に import さ せ, struck の 蛍 を than light portraits 処 Richard し の quantitative を line っ て, intracellular distribution た. 3. The construction of <s:1> 観 observation of the dynamic <s:1> of the シ シ 繊 繊. 繊 の overlap, take off the line overlap を っ て い る others child born を き た intracellular で す was 観 る た め に, cell の thick さ を thin く し て, a 々 の 繊 d を 観 examine し や す い method を beg し 検 た. Youdaoplaceholder0 そ results, constant で な な が が, 繊 dimensional image 観 観 observe に successfully た た. The <s:1> な, まだ, and 繊 dimensions <s:1> overlap and de-overlap processes are まだ capture えられて な な な. Low temperature 処 Richard し て, ミ オ シ ン の motility を under げ る こ と で 観 examine が may に な る と exam え て お り, in the future, research を 継 続 す る designated で あ る. 4. Youdaoplaceholder0 light marker ア チ チ と と 2 re-import. Different な る で 蛍 photopigment で logo し た ア ク チ ン と ミ オ シ ン を in cells に に import す る conditions の 検 line for を っ た が and examines 観 に very resistant to え concentration る の import は の now successful し て い な い. The 蛍 light ア チ チ チ 単 単 single <s:1> was successfully imported into に に and た. Condensed ring におけるア, チ, チ, <s:1> condensed に related <s:1> て, く, く, <s:1> new knowledge が, られた.

项目成果

祐村恵彦: "細胞を動かすしくみを探る" Biohistory. 3. 10 (1995)

Keihiko Yumura：“探索细胞移动的机制”生物历史 3. 10 (1995)。

Yumura,S.: "Introduction of macromolecules into living Dictyostelium cells by electroporation." Cell Struct.Funct.20. 185-190 (1995)

Yumura,S.：“通过电穿孔将大分子引入活盘基网柄菌细胞。”

Yumura,S.: "Rapid redistribution of myosin II in living Dictyostelium amoebae,as revealed by fluorescent probes introduced by electroparation." Protoplasma. (印刷中).

Yumura, S.：“通过电分离引入的荧光探针揭示了活体盘基网柄菌中肌球蛋白 II 的快速重新分布（正在出版）。”

Okazaki,K.: "Differential association of three actin-bundling proteins with microfilaments in Dictyostelium amoebae." Europ.J.Cell Biol.66. 75-81 (1995)

Okazaki,K.：“三种肌动蛋白捆绑蛋白与阿米巴盘基网柄菌微丝的差异关联。”