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エナージトランスファーを利用した生細胞内繊維化アクチンの選択的可視化の試み

尝试利用能量转移选择性地观察活细胞中的原纤维化肌动蛋白

基本信息

批准号：
10878129
负责人：
祐村恵彦
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10878129/
关键词：
エナージトランスファー

项目摘要

エナージトランスファーの効率がよい2種の色素で精製したアクチンに標識した。標識アクチンの混合比を最大のエナージトランスファー効率になるように、試験管内で決定した。試験管内で標識アクチンを繊維化させ、繊維化したアクチンのみが観察できる条件を設定した。in vitroの状態では、アクチン繊維一本一本を見ることが予想されたが、トランスファー効率が低いため、束になったもので確認できるレベルであった。次に、上での予備実験をもとに、2種の標識アクチンを細胞内に導入した。導入は、エレクトロポレーション法を用いた。エナージトランスファーによって繊維化アクチンのみが観察できた。ただやはりトランスファー効率が低いため、画像としては弱く、さらに超高感度のカメラが必要であろう。精製蛋白を化学的に蛍光標識する代わりに、green fluorescence proteinとbluefluorescence protein(GFP.BFP;ともに、クラゲ蛍光蛋白質)とそれぞれ融合させたアクチンを細胞内で発現させることを試みている。現在GFP-アクチン遺伝子の発現に問題があり、検討中である。この両蛍光蛋白質間でもエナージトランスファーが起こることが報告されているので、細胞内の繊維化アクチンを可視化できると考えられる。

エナージトランスファーのefficiencyがよい2 kinds of pigments and refined したアクチンにLOGO. Mark the mixing ratio of the maximum mixing ratio, the efficiency of the mixture, and the determination in the test tube. In the test tube, there are signs of "アクチンを繊dimensionalization" and "dimensionalization" of "conditions" and "settings". in The state of vitro is では、アクチン繊dimensional one by oneを见ることがyuthinkされたが、トランスファーefficiencyがいため、tractorになったものでconfirmationできるレベルであった. The second one, the upper one is prepared, the two kinds of signs are introduced into the cell. Import は, エレクトロポレーション法を用いた.エナージトランスファーによって繊dimensionalization アクチンのみが観看できた. The efficiency is low, the image is weak, and the ultra-high sensitivity is necessary. Purified protein を chemical light mark する generation わりに, green fluorescence protein と blue fluorescence protein (GFP.BFP; ともに, クラゲ蛍光protein) and とそれぞれfusion させたアクチンを intracellular で発appears させることをtrial みている. Now GFP-アクチン缝子の発appears as a problem and as a problem.この佡蛍proteinbetween でもエナージトランスファーが出こることがreportされているので, intracellular dimensionalization アクチンをvisualization できると考えられる.