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細胞分裂.運動時のミオシンの動的構築機構

细胞分裂：运动过程中肌球蛋白的动态组装机制

基本信息

批准号：
06275208
负责人：
祐村恵彦
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06275208/
关键词：
ミオシン蛍光標識細胞分裂

项目摘要

1.ミオシンの蛍光標識法の検討。細胞性粘菌よりミオシンを単離し、蛍光標識した。蛍光色素としては、5-iodoacetoamido fluoresceinほかいくつかで試みた。この蛍光標識ミオシンのATPase活性、繊維形成能などを標識していないミオシンと比較し、蛍光標識によりあまり活性の変化のない標識条件を調べた。2.蛍光標識ミオシンの細胞内導入法の検討。まず、エレクトロポレーション法により、蛍光標識した高分子を細胞内に導入する条件を検討した。その結果、外液の濃度、電圧の調節により、高分子を希望の量だけ導入する条件がえられた。ミオシンの導入も可能となったが、現段階では、いくつかの問題点が残っている。そのひとつは、ミオシンは高イオン強度条件でのみ、単量体になるが、この条件では、導入後、細胞が破裂しやすいことである。これらの問題も、現在解決しつつある。3.蛍光標識ミオシンの導入量の検討。細胞内に導入するミオシンの量を変えて、細胞の運動活性、分裂能をビデオにモニターし、行動解析プログラムを用い、細胞に影響を与えない導入量を算出することを試みた。現段階で導入できている量の蛍光標識ミオシンによって、細胞の運動性は変化していない。4.細胞内に導入された蛍光標識ミオシンの挙動の解析。導入された蛍光標識ミオシンを、超高感度カメラでモニターし、その細胞内での挙動を解析した。細胞分裂時に、導入された蛍光標識ミオシンは収縮環に集まってくることがわかった。また、細胞の運動時には、細胞尾部への蛍光標識ミオシンの局在化が観察された。細胞の運動に伴って、ミオシンのすみやかな分布変化がみられた。このような観察は、運動性の細胞で初めて得られたものである。

1. A discussion on the identification method of light in three colors. The cellular myxomycetes were isolated and identified. 5-iodoacetoamide fluorescein The ATPase activity and vitamin formation energy of the fluorescent light marker were adjusted by comparing the fluorescent light marker activity and the fluorescent light marker activity. 2. Study on the method of intracellular introduction of light marker gene. The conditions for introducing polymers into cells are discussed in this paper. The results, concentration of external liquid, regulation of voltage, desired amount of polymer and introduction conditions are described. The problem points of the current stage are not solved. The cell is broken after introduction.これらの问题も、现在解决しつつある。3. Check the import quantity of the light identification system. The amount of cells introduced into the cell, the activity of the cell. At this stage, the amount of light that is introduced into the cell is changed, and the motility of the cell changes. 4. Analysis of the movement of the intracellular light marker system Introduction of light identification, ultra-high sensitivity, and intracellular motion analysis When a cell divides, it is introduced into the cell. When the cell moves, the tail of the cell is marked by light. Cell movement is accompanied by changes in the distribution of cells. This is the first time that a cell has been activated.