細胞分裂.運動時のミオシンの動的構築機構

细胞分裂：运动过程中肌球蛋白的动态组装机制

• 批准号: 06275208
• 负责人: 祐村 恵彦
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06275208/
• 关键词: ミオシン; 蛍光標識; 細胞分裂

1.ミオシンの蛍光標識法の検討。細胞性粘菌よりミオシンを単離し、蛍光標識した。蛍光色素としては、5-iodoacetoamido fluoresceinほかいくつかで試みた。この蛍光標識ミオシンのATPase活性、繊維形成能などを標識していないミオシンと比較し、蛍光標識によりあまり活性の変化のない標識条件を調べた。2.蛍光標識ミオシンの細胞内導入法の検討。まず、エレクトロポレーション法により、蛍光標識した高分子を細胞内に導入する条件を検討した。その結果、外液の濃度、電圧の調節により、高分子を希望の量だけ導入する条件がえられた。ミオシンの導入も可能となったが、現段階では、いくつかの問題点が残っている。そのひとつは、ミオシンは高イオン強度条件でのみ、単量体になるが、この条件では、導入後、細胞が破裂しやすいことである。これらの問題も、現在解決しつつある。3.蛍光標識ミオシンの導入量の検討。細胞内に導入するミオシンの量を変えて、細胞の運動活性、分裂能をビデオにモニターし、行動解析プログラムを用い、細胞に影響を与えない導入量を算出することを試みた。現段階で導入できている量の蛍光標識ミオシンによって、細胞の運動性は変化していない。4.細胞内に導入された蛍光標識ミオシンの挙動の解析。導入された蛍光標識ミオシンを、超高感度カメラでモニターし、その細胞内での挙動を解析した。細胞分裂時に、導入された蛍光標識ミオシンは収縮環に集まってくることがわかった。また、細胞の運動時には、細胞尾部への蛍光標識ミオシンの局在化が観察された。細胞の運動に伴って、ミオシンのすみやかな分布変化がみられた。このような観察は、運動性の細胞で初めて得られたものである。

1. The optical marking method 検 is discussed. Cellular slime molds よ シ, シ, シ, を単 are separated from <s:1> and 蛍 light markers た た. Youdaoplaceholder0 photopigment と て て みた, 5-iodoacetoamido fluoresceinほ ほ く く で で try みた. こ の 蛍 light logo ミ オ シ ン の ATPase activity and 繊 d can form な ど を logo し て い な い ミ オ シ ン と し, 蛍 light logo に よ り あ ま の り activity - the の な い identification conditions を adjustable べ た. 2. Youdaoplaceholder0 light labeling 検 シ シ シ <s:1> <s:1> intracellular introduction method 検 検 discussion. ま ず, エ レ ク ト ロ ポ レ ー シ ョ ン method に よ り 蛍 light logo し た polymer を intracellular に import す る conditions を beg し 検 た. Youdaoplaceholder0 そ result, external liquid <s:1> concentration, voltage <s:1> regulation によ, polymer を desired <s:1> amount だけ introduction する conditions がえられた. The possible となったが, current stage で で, <s:1> く く く となったが <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> が problem points が residual って る る る. そ の ひ と つ は, ミ オ シ ン は high イ オ ン strength conditions で の み, 単 quantity body に な る が, こ の conditions で は, after import, cell が burst し や す い こ と で あ る. Youdaoplaceholder0 れら the problem れら, now solve the ある れら ある ある ある. 3. Youdaoplaceholder0 light indicator: <s:1> シ シ シ <s:1> import quantity 検 検. Intracellular に import す る ミ オ シ ン の quantity を - え て, cell の sports activity, can divide を ビ デ オ に モ ニ タ ー し, action parsing プ ロ グ ラ ム を い, cell に influence を and え な い を import quantity calculated す る こ と を try み た. Now Duan Jie で import で き て い る quantity の 蛍 light logo ミ オ シ ン に よ っ て, cell の motility は variations change し て い な い. 4. Intracellular に introduction of された蛍 light markers シ シ <s:1> 挙 motion <e:1> analysis. Import さ れ た 蛍 light logo ミ オ シ ン を, ultra-high sensitivity カ メ ラ で モ ニ タ ー し, そ の intracellular で の 挙 dynamic analytical し を た. During cell division, に and された蛍 light are introduced to mark the <s:1> シ シ <s:1> された蛍 contraction ring に set まってくる とがわ とがわ とがわ った った った. Youdaoplaceholder0, when cells <s:1> move, に に, へ at the tail of cells, 蛍 light marks, <s:1> シ シ, シ, the local area が観 is observed された. Cellular <s:1> movement に is accompanied by って, and the distribution changes of シ シ シ <s:1> すみや な な な がみられた がみられた がみられた are がみられた. <s:1> ような観 ような観 examination of, motor <s:1> cells で initial めて られた <s:1> である である である.

项目成果

Yumura,S.: "Rapid translocation of myosin II in vegetative Dictyostelium amoeba during stimulation by folic acid." Cell Struct.Funct.19. 143-151 (1994)

Yumura,S.：“在叶酸刺激期间，营养网网柄菌阿米巴中肌球蛋白 II 的快速易位。”