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ユビキチン化関連酵素E4Bによる神経変性防御機構の解明

泛素化相关酶 E4B 阐明神经退行性防御机制

基本信息

批准号：
19044034
负责人：
松本雅記
金额：
$ 4.22万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

E4B遺伝子改変マウスの解析神経特異的なE4Bノックアウトマウス(E4B-CKOマウス)は正常に発生したが、20週令までにほとんどが突然死を起こした。突然死の原因として癲癇発作が疑われた。一方、E4Bトランスジェニックマウス(E4B-TG)は高度に脂肪が蓄積する肥満マウスとなった。E4B-TGマウスの室傍核(PVN)においてグリオーシが認められた。この領域に神経変性など何らかの異常が生じている可能性が示唆された。また, PVNは満腹中枢として機能しており, この領域の異常は過食を引き起こすため, 本トランスジェニックマウスで見られた表現型はこの領域の異常が主たる原因と考えられた。上記E4BC-KOマウスおよびE4B-TGマウスとの交配による遺伝学的解析を目的としてataxin-3 TGマウスを作製したが、上述したようにE4B CKOおよびTGマウスともに単独で神経系の異常に起因すると思われる表現型を示したため、現在交配を見合わせている。発現プロテオミクスによるE4Bの下流分子の探索上記E4B遺伝子改変マウスの脳組織を用いて2D-DIGE法*およびiTRAQ法による発現プロテオーム解析を行った。これらの結果からPSD-95やNMDA受容体などの後シナプス膜に存在するタンパク質が蓄積していることを見出した。さらに、in vitroユビキチン化反応系を用いた活性プロテオミクス解析法を確立し、E4Bコンディショナルノックアウトマウスの脳抽出液に適用し, GABAトランスポーターが顕著に減少していることが判明した。

Traces of E4B 伝 child change - マウスの parsing god 経 specific な E4B ノックアウトマウス (E4B - the CKO マウス) は normal に発 raw したが, 20 weeks までにほとんどがを up all of a sudden death こした. The cause of sudden death is とてて epileptic seizure が suspected われた. One party, E4Bトラスジェニッスジェニッスジェニッスジェニッウスウス(e4B-tg) <s:1> high に fat が accumulation する fimbriation ウスとなったウスとなった. E4B-TG におウス <s:1> parietal nucleus (PVN)におてグリてグリ <s:1> シがめられためられためられためられためられためられためられた. The に theodynamism of the <s:1> domain なな and らが <s:1> anomalies が give birth to じてるる possibilities が suggest された. また, PVN は against the abdomen central として function しており, このの field anomaly は overeating を lead き up こすため, this トランスジェニックマウスで see られた phenotype はこのの field anomaly が main たる reason と exam えられた. Written E4BC - KO マウスおよび E4B - TG マウスとの mating による purpose but 伝 learn analytical をとして ataxin - 3 TG マウスを cropping したが, the above したように E4B The CKO および TG マウスともに単で経 god alone is の cause abnormal にすると think われる phenotype を shown したため, mating を now see わせている. 発 now プロテオミクスによる E4B の low molecular の explore written traces of E4B 伝 child change - マウスのを脳 organization with いて 2 d - DIGE method * および iTRAQ method による発 now プロテオーム parsing line をった. これらの results から PSD - 95 - s や NMDA by let body などの after シナプス membrane に exist するタンパク qualitative が accumulation していることを shows した. さらに, the in vitro ユビキチン of the anti 応を with いた active プロテオミクス analytic method を establishing し, E4B コンディショナルノックアウトマウスの脳 extract に applicable し, GABA トランスポーターが顕 the に reduce していることが.at した.