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異常タンパク質蓄積による神経変性疾患発症の分子機構の解明

阐明蛋白质异常积累导致神经退行性疾病发病的分子机制

基本信息

批准号：
18023017
负责人：
松本雅記
金额：
$ 5.31万
依托单位：
Kyushu University (2007)Nagoya University (2006)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

1) E4B遺伝子改変マウスの作製と解析E4B(-/-)ノックアウトマウスは胎生致死であった。一方、E4B(+/-)マウスはPurkinje細胞の変性を認め、運動失調(歩行障害)を示した。さらにE4Bの機能を詳細に解析するために、E4Bを神経特異的に欠損したマウス(E4B CKO)の作製を行い、行動学的解析や病理学的解析によりE4Bの機能を解析した。E4Bコンディショナルノックアウトマウス(E4B CKOマウス)は正常に発生したが、20週令までにほとんどが突然死を起こした。突然死の原因として癩癇発作が疑われたが、実際、癩癇誘発剤に対する感受性は野生型マウスと比較して明らかに高かった。2) E4Bの基質分子の探索このように、E4Bが神経変性の防御機構において極めて重要な分子であり、脳神経系におけるE4Bの基質探索の重要性が浮き彫りとなった。そこで、E4Bヘテロノックアウトマウスにおいて蓄積しているタンパク質(E4Bの基質候補)を種々のプロテオミクス技術を用いて探索を試みた。2D-DIGE法によって野生型マウスとE4Bノックアウトマウスの発現プロテオーム比較を行った。その結果、複数のスポットがE4Bノックアウトマウスにおいて増加していることが明らかとなった。これらの変動したスポットは質量分析計による同定を終え、現在、検証実験を行っている。さらに.超高感度nanoLC-タンデム質量分析計と安定同位体標識法を組み合わせることで、大規模なタンパク質の発現定量解析システムを行い、2D-DIGE法ではとらえることができなかった微量タンパク質の変動を見出した。また、E4Bの基質探索のための他の方法として、in vitroユビキチン化アッセイを用いたE4B依存的なユビキチン化タンパク質の検出システムを構築した。今後、これらの異なる手法で得られたE4B基質候補分子のリストを総合的に判断し、絞り込みを行ったうえで詳細な解析を進める予定である。

1)E4B (-/-) One side, E4B (+/-) E4B functions are analyzed in detail, and E4B functions are analyzed in detail. E4B CKO is a very common occurrence and a sudden occurrence in 20 weeks. The cause of sudden death is suspected, and the susceptibility to epilepsy is higher than that of wild type. 2)E4B matrix molecular exploration, E4B and nervous system defense mechanism in the extremely important molecular, nervous system in the importance of E4B matrix exploration E4B matrix candidates are used to explore and explore the potential of E4B matrix technologies. 2D-DIGE method is used to compare the wild type with E4B. The results of the study are as follows: The quality analysis system is based on the quality control system, the quality control system and the quality control system.さらに. Ultra-sensitive nanoLC mass spectrometry and stable isotope labeling methods are combined, large-scale mass spectrometry and quantitative analysis are performed, and 2D-DIGE methods are used to detect trace mass spectrometry. Other methods for E4B matrix exploration and construction of E4B-dependent matrix In the future, we will find out how to combine the E4B matrix candidate molecules and make detailed analysis.