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異常タンパク質蓄積による神経変性疾患発症の分子機構の解明

阐明蛋白质异常积累导致神经退行性疾病发病的分子机制

基本信息

批准号：
18023017
负责人：
松本雅記
金额：
$ 5.31万
依托单位：
Kyushu University (2007)Nagoya University (2006)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

1) E4B遺伝子改変マウスの作製と解析E4B(-/-)ノックアウトマウスは胎生致死であった。一方、E4B(+/-)マウスはPurkinje細胞の変性を認め、運動失調(歩行障害)を示した。さらにE4Bの機能を詳細に解析するために、E4Bを神経特異的に欠損したマウス(E4B CKO)の作製を行い、行動学的解析や病理学的解析によりE4Bの機能を解析した。E4Bコンディショナルノックアウトマウス(E4B CKOマウス)は正常に発生したが、20週令までにほとんどが突然死を起こした。突然死の原因として癩癇発作が疑われたが、実際、癩癇誘発剤に対する感受性は野生型マウスと比較して明らかに高かった。2) E4Bの基質分子の探索このように、E4Bが神経変性の防御機構において極めて重要な分子であり、脳神経系におけるE4Bの基質探索の重要性が浮き彫りとなった。そこで、E4Bヘテロノックアウトマウスにおいて蓄積しているタンパク質(E4Bの基質候補)を種々のプロテオミクス技術を用いて探索を試みた。2D-DIGE法によって野生型マウスとE4Bノックアウトマウスの発現プロテオーム比較を行った。その結果、複数のスポットがE4Bノックアウトマウスにおいて増加していることが明らかとなった。これらの変動したスポットは質量分析計による同定を終え、現在、検証実験を行っている。さらに.超高感度nanoLC-タンデム質量分析計と安定同位体標識法を組み合わせることで、大規模なタンパク質の発現定量解析システムを行い、2D-DIGE法ではとらえることができなかった微量タンパク質の変動を見出した。また、E4Bの基質探索のための他の方法として、in vitroユビキチン化アッセイを用いたE4B依存的なユビキチン化タンパク質の検出システムを構築した。今後、これらの異なる手法で得られたE4B基質候補分子のリストを総合的に判断し、絞り込みを行ったうえで詳細な解析を進める予定である。

1) E4B's legacy is adapted from the production and analysis of E4B(-/-)ノックアウトマウスは生死死であった. On the one hand, E4B (+/-) Purkinje cells show abnormality and dyskinesia (walking disorder).さらにE4BのfunctionをDetailed analysisするために、E4Bを神経specificに无码したマウス(E4B CKO) no production line, behavioral analysis, pathological analysis, E4B functional analysis. E4B コンディショナルノックアウトマウス(E4B CKO's normal life is normal, and the 20-week order is sudden death. The cause of sudden death is としてepilepsy 発作がsuspect われたが, 実 Ji, eclampsia-induced 発剤に対する sensitivities は wild type マウスと comparison して明らかに高かった. 2) E4B's matrix molecule's exploration and E4B's defense mechanism are extremely heavy. It is important to explore the matrix of E4B's molecular structure, and to explore the importance of the molecular structure.そこで, E4B ヘテロノックアウトマウスにおいて accumulates しているタンパクquality (E4B's matrix candidate) をkind of 々のプロテオミクスTechnology を Exploration with いてをTrial みた. 2D-DIGE method is a wild-type マウスとE4B ノックアウトマウスの発成プロテオーム comparison を行った.そのRESULT, plural のスポットがE4Bノックアウトマウスにおいて嗗加していることが明らかとなった.これらの変动したスポットは Mass analyzer による同定をFinalえ、Now、検证実験を行っている.さらに. Ultra-high sensitivity nanoLC-タンデム mass analyzer and stable isotope labeling method を combination わせることで, large-scale なタンパク mass The quantitative analysis of the システムを行い, the 2D-DIGE method and the ではとらえることができなかった trace amount of タンパクquality の変动を见出した.また、E4B's matrix exploration のためのhis method として、in The in vitro ユビキチン化アッセイを is built with the なユビキチン化タンパクquality の検出システムを which is dependent on いたE4B. From now on, the これらのなる technique will be used to obtain the られたE4B matrix candidate molecule のリストを総The judgment of the combination, the detailed analysis of the details, the detailed analysis of the details, and the predetermined decision.