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H、K-ATPaseの高次構造

H,K-ATP酶的高阶结构

基本信息

批准号：
63617504
负责人：
竹口紀晃
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Toyama Medical and Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63617504/
关键词：
H、K-ATPase オメプラゾール胃酸分泌 Cl^-チャネル

项目摘要

胃腺によるH^+の分泌はH、K-ATPaseによる。この酵素のアミノ酸一次配列は既に明らかになっている。ATP結合部位、リン酸化部位におけるアミノ酸一次配列はNa、K-ATPaseやCa^<2+>-ATPaseのものとほとんど一致している。しかし、N末端やC末端におけるアミノ酸配列はかなり異なっており、その機能の違いを反映している。この一次構造の違いに基づく高次構造が、「H^+とK^+のアンチポート機能」及び我々が既に明らかにした「H^+、K^+-ATPaseの一部にCL^-チャネル機能も備わっていること(J.Biol.Chem.1987)を可能ならしめている。しかし、現在までのところH、K-ATPaseの高次構造についてはいくつかの仮定的推論があるのみで、実体としてはほとんど捉えられていない。従って本研究では、複数の機能的単クローン抗体を開発し、その高次構造確認部位を明らかにして、これを高次構造プローブとして利用することでH、K-ATPaseの高次構造及びそのイオン能動輸送機序の解明をめざした。ブタ胃H、K-ATPaseを抗原として、単クローン抗体HK2032、HK4001、HK4008、HK4009、HK4013といった、種々の機能修飾性の抗体を得た。HK4001は胃H、K-ATPaseの酵素活性を100%阻害した。抗体1分子がH、K-ATPaseのサブユニット2個を失活させた。このような高効率の阻害活性を有する抗体は、Na、K-ATPaseにおいても知られていない。この抗体はH^+認識部位の高次構造を修飾するとの結果が得られている。この抗体を化学修飾すると、H^+のかわりにCa^<2+>を認識するように変化するという興味深い事実が得られた。他の抗体についても、それぞれ酵素機能を修飾する能力が高い。特にHK4009はCl^-チャネルに特異的に結合する。今後これらの抗体を使った仕事を進めれば、H、K-ATPaseの機構解明は大いに進展することが期待される。

The secretion of H ^+ in the gastric glands is related to H and K-ATPase. This enzyme is not only suitable for the production of acid, but also suitable for the production of acid. ATP binding site, ATP acidification site, Na, K-ATPase, Ca ^<2 +>-ATPase, Ca ^<2 +>-ATPase N-terminal and C-terminal acid sequences are different, and their functions are different. The first order structure of this kind is related to the basic structure and the higher order structure,"H ^+, K ^+ and C ^+-ATPase function" and "H ^+, K ^+-ATPase part CL ^-C ^+-ATPase function"(J. Biol. Chem. 1987). K-ATPase higher-order structure is the most important factor in the evolution of K-ATPase, and it is the most important factor in the evolution of K-ATPase. In this study, we have developed multiple functional monoclonal antibodies, clarified the higher-order structural confirmation sites, and utilized these higher-order structural solutions to understand the higher-order structure of H, K-ATPase and the molecular dynamic conveyor sequence. Antibodies HK 2032, HK 4001, HK 4008, HK 4009 and HK 4013 were obtained. HK 4001 inhibits 100% of H and K-ATPase enzyme activity. Antibody 1 molecule H, K-ATPase and 2 molecules inactivated. The antibody has high efficiency and harmful activity. Na, K-ATPase can be detected in the medium. The antibody was modified by the higher order structure of the H ^+ recognition site. The antibody is chemically modified, H ^+ and Ca ^+ is recognized, and the interest is deep. The ability of his antibody to modify the function of enzymes is high. HK 4009 is specifically designed to bind to Cl ^-2. In the future, the mechanism of antibody activation is expected to improve.