ジーントラップにCre/loxPを組み合わせた遺伝子改変マウスライブラリーの作製

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本研究は、ジーントラップ法によりランダムに遺伝子を破壊したES細胞から順次キメラマウスを作製し、実験動物として供給するための遺伝子改変マウスライブラリーを作ることを主目的としている。1)ES細胞でのジーントラップと破壊遺伝子の同定PGKプロモーターの制御下に内在性遺伝子のpoly-A付加シグナルを利用してPuromycin耐性遺伝子を発現する、と同時に、内在性遺伝子のプロモーターの制御下にCreリコンビナーゼを発現する新規トラップベクターを開発した。このトラップベクターを用いてES細胞でジーントラップを行い、約600個の薬剤耐性クローンを単離、解析した。残念ながら、トラップベクターの構築不備等により、内在性遺伝子がトラップされたものは64クローンであった。トラップした遺伝子を3'-RACEにより解析した結果、既知遺伝子が9つ、ESTで報告されている遺伝子が2つ、それ以外は新規遺伝子であった。現在、ベクターを改良するとともに、トラップ実験を続けている。2)ES細胞クローンからのキメラマウス作製と解析トラップした遺伝子を同定できたES細胞クローンから、順次キメラマウスを作製している。その結果、これまでに約10ラインの遺伝子欠損マウスを作製することに成功している。今後は、ホモ個体にしてマウスの表現型を調べると同時に、遺伝性疾患との関連についても検討する。またトラップした遺伝子のプロモーターの制御下にCreリコンビナーゼが正しく発現しているかどうか検討し、コンディショナルノックアウトマウス作製のcre発現トランスジェニックマウスとしての有用性についても調べる。