エチルニトロソウレアによるメダカ変異体の収集に基づく胸腺器官形成機構の解析

基于乙基亚硝基脲收集青鳉突变体分析胸腺器官形成机制

• 批准号: 15011240
• 负责人: 高濱 洋介
• 金额: $ 2.43万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15011240/
• 关键词: Tリンパ球; 細胞分化; 胸腺; rag1; エチルニトロソウレア; メダカ

ヒトを含めた脊椎動物の免疫システムの中枢を担うTリンパ球の成熟は胸腺で起こる。しかし、Tリンパ球の成熟支持能に至る胸腺器官形成の分子機構は殆ど不明である。私たちはこれまで、エチルニトロソウレア処理による変異導入によって、メダカを対象にした胸腺形成変異体をゲノム網羅的に作製してきた。本研究では、これらの変異体を用いて胸腺の器官形成をつかさどる遺伝素因を網羅的に解明することを目的に実験を行った。まず、エチルニトロソウレアによりランダムに誘発した突然変異をホモ接合に持つメダカ胚を作成し、胸腺に発現するrag1遺伝子プローブを用いて後期胚胸腺を可視化検出することで、胸腺形成変異体の大規模スクリーニングを行った。これまでにメダカ全ゲノムの約60%をカバーする538のF2ファミリーをスクリーニングすることにより、胸腺形成に特異的な異常を示す変異体系統を22得た。そのうち表現型がより胸腺発生に特異的な10系統の変異体に関して、胸腺発生の何れの段階に異常が見られるのかを細胞系譜特異的遺伝子発現パターンの解析によって明らかにした。また、マイクロサテライトマーカーを指標にしたポジショナルクローニングにより原因遺伝子に近づき、BACライブラリーを用いた染色体歩行を行うことで、変異体の原因遺伝子の同定を目指した。また、野生型メダカおよび表皮の色素形成に異常を持ち臓器の観察に適したメダカSTII系統(名古屋大学若松祐子博士との共同研究)を用いて胸腺の発生過程を明らかにするとともに、リンパ球の活性測定によりメダカのTリンパ球に関する基礎知識を蓄積した。今後は、既に部分的にクローニングしているrag1遺伝子のゲノムDNA全長を得ることで、rag1-GFPトランスジェニックメダカを作製し、これらによって変異体のTリンパ球成熱と機能異常を解析する。

ヒ ト を containing め た vertebrate immune シ の ス テ ム の central を bear う T リ ン パ shot の mature は thymus で こ る. The mature support of the に to る thymus organ formation <s:1> molecular structure に is almost <e:1> unknown である. Private た ち は こ れ ま で, エ チ ル ニ ト ロ ソ ウ レ ア 処 Richard に よ る - different import に よ っ て, メ ダ カ を like に seaborne し た thymus form - variant を ゲ ノ ム snare the に system し て き た. This study で は, こ れ ら の - variant を with い て thymus の organ formation を つ か さ ど る heritage 伝 element for を snare に interpret す る こ と に を purpose be 験 を line っ た. ま ず, エ チ ル ニ ト ロ ソ ウ レ ア に よ り ラ ン ダ ム に 発 lure し た suddenly - different を ホ モ joint に hold つ メ ダ カ embryo を make し, thymus に 発 now す る rag1 posthumous son 伝 プ ロ ー ブ を with い て late embryo thymus を visualization 検 out す る こ と で, thymus formation - の massive allograft ス ク リ ー ニ ン グ を line っ た. こ れ ま で に メ ダ カ full ゲ ノ ム の about 60% を カ バ ー す る の 538 F2 フ ァ ミ リ ー を ス ク リ ー ニ ン グ す る こ と に よ り and thymus を forming abnormal に specific な す た を 22 - foreign system. そ の う ち phenotype が よ り thymus 発 raw に specific な 10 system の - variant に masato し て, thymus 発 raw の れ の Duan Jie に abnormal が see ら れ る の か を cells pedigree specific heritage 伝 son 発 now パ タ ー ン の parsing に よ っ て Ming ら か に し た. ま た, マ イ ク ロ サ テ ラ イ ト マ ー カ ー を index に し た ポ ジ シ ョ ナ ル ク ロ ー ニ ン グ に よ り reason but 伝 child に nearly づ き, BAC ラ イ ブ ラ リ ー を with い た chromosome step line を う こ と で, 1 - の reason but 伝 の with fixed を refers し た. ま た, wild type メ ダ カ お よ の び skin pigment forming abnormal に を hold ち viscera の 観 examine に optimum し た メ ダ カ STII system (Nagoya university if Dr Pine - you son と の joint research) を with い て thymus の 発 birth process を Ming ら か に す る と と も に, リ ン パ ball の activity determination に よ り メ ダ カ の T リ ン パ ball に masato す る knowledge accumulation し を た. は, に part both in the future に ク ロ ー ニ ン グ し て い る rag1 posthumous son 伝 の ゲ ノ ム DNA span を so る こ と で, rag1 GFP ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク メ ダ カ を as し, こ れ ら に よ っ て - variant の T リ ン パ ball into hot と parafunction を parsing す る.

项目成果

Tomita, S., et al.: "T cell-specific disruption of aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator (Arnt) gene causes resistance to 2378-tetrachlorodibenzo-p-dioxin-induced thymic involution"J.Immunol. 171. 4113-4120 (2003)

Tomita, S. 等人：“T 细胞特异性破坏芳基碳氢化合物受体核易位子 (Arnt) 基因导致对 2378-四氯二苯并-对-二恶英诱导的胸腺退化产生抗性”J.Immunol。

Nakase H., et al.: "Effect of CpG methylation on RAG1/RAG2 reactivity : implications if direct and indirect mechanisms for controlling V(D)J cleavage."EMBO Reports. 4. 774-780 (2003)

Nakase H. 等人：“CpG 甲基化对 RAG1/RAG2 反应性的影响：控制 V(D)J 裂解的直接和间接机制的影响。”EMBO 报告。

Akamatsu, Y., et al.: "Deletion of the RAG2 C-terminus leads to impaired lymphoid develepment in mice."Roc.Natl.Acad.Sci.USA.. 100. 1209-1214 (2003)

Akamatsu, Y., et al.：“RAG2 C 末端的删除会导致小鼠淋巴发育受损。”Roc.Natl.Acad.Sci.USA.. 100. 1209-1214 (2003)

Nasreen, M., et al.: "In vivo treatment of class II MHC-deficient mice with anti-TCR antibody restores the generation of circulating CD4 T cells and optimal architecture of thymic medulla"J.Immunol.. 171. 3394-3400 (2003)

Nasreen, M. 等人：“用抗 TCR 抗体对 II 类 MHC 缺陷型小鼠进行体内治疗可恢复循环 CD4 T 细胞的生成和胸腺髓质的最佳结构”J.Immunol.. 171. 3394-3400

Sheard, M.A, et al.: "Development status of CD4-CD8+ and CD4+CD8- thymocytes with medium expression of CD3."Eur.J.Immunol.. 34. 25-35 (2004)

Sheard, M.A, 等人：“具有 CD3 中等表达的 CD4-CD8 和 CD4 CD8-胸腺细胞的发育状态。”Eur.J.Immunol.. 34. 25-35 (2004)