新たな遺伝子クローニングシステムNACSを応用した疾患遺伝子の同定

使用新基因克隆系统 NACS 鉴定疾病基因

• 批准号: 15012208
• 负责人: 荒瀬 尚
• 金额: $ 3.78万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15012208/
• 关键词: cDNAライブラリー; レトロウィルス; リンパ球; ITAM; リン酸化; シグナル伝達; エストロジェンレセプター; CD8

私どもは、新たな機能的遺伝子クローニングシステムとしてNACS法(NFAT Activating Molecule Cloning System)を開発した.本研究では、NACS法の応用法を開発することによって、新たな細胞活性化機構、細胞分化機構の解明を目指し、それを基にヒト疾患遺伝子を明らかにすることを目的とし、今年度より本研究班で研究を始めた。NACS法では、ランダムプライマーで作成したcDNAライブラリーとCD8分子の細胞外領域とのキメラが作られるライブラリーを作製することになるため、cDNAライブラリーの質が、決定的に重要である。そこで、本年度ではまず、cDNAライブラリーの質を高めるために、cDNAの合成条件を検討した。今までのライブラリーでは、cDNAの合成長が長過ぎるために、翻訳開始点より上流からCD8とのキメラになっているクローンが多く、そのために、目的の遺伝子がクローニングできない欠点が認められた。そこで、cDNA合成の際に、ランダムプライマーの濃度を通常の50倍程度にすることにより、比較的小さいサイズのCD8キメラライブラリーを作成することに成功した。実際、新たに作成したライブラリーでスクリーニングすることにより、今までにクローニングできなかったCD3ζ等の既知のITAMを有する分子のほか、新たな4回膜貫通型の活性化制御分子をクローニングすることに成功した。そこで、本研究では、今回確立した、ライブラリー作成方法を基に、さらに、他の組織のライブラリーの作成を進めるほか、エストロジェンレセプターとのキメラライブラリーを作成することにより、転写因子等の新たな、リンパ球活性化制御分子のクローニング方法の確率を目指す。

NACS method (NFAT Activating Molecule Cloning) System), the method used in this study, the use of NACS method, the new cell activation mechanism, and cell analysis The purpose of this research is the beginning of this year's research group. The NACS method is used to create cDNA in the extracellular domain of the CD8 molecule using the NACS method.することになるため, cDNAライブラリーの性が, the decision is important.そこで, this year's ではまず, cDNA ライブラリーの性を高めるために, cDNA's synthesis conditions を検した. Today's までのライブラリーでは, cDNA's synthetic long が长OVER ぎるために, the starting point of translation is より上流 からCD8 とのキメラになっているクローンが多く、そのために、Purposeの伝子がクローニングできない owes the point of recognition められた.そこで, cDNA synthesis method, ランダムプライマーのconcentration is usually 50 times the level of にすることにより、Comparative small さいサイズのCD8 キメラライブラリーをproduced することにした.実记、新たに成したライブラリーでスクリーニングすることにより、Now までにクローニングできなかったCD3ζ We are waiting for the success of the already known ITAM molecule and the new 4-back membrane penetration type activated control molecule をクローニングすることに.そこで、This study では、This time established the した、ライブラリーmaking method をbased に、さらに、His organization's のライブラリーの成を进めるほか、エストロジェンレセプターとのキメラライブラリーを成することにより, 転WRAP factor, etc. The accuracy of the new たな, リンパ ball activated control molecule method is specified.

项目成果

Arase, N.: "IgE-mediated activation of NK cells through Fc γ RIII."J.Immunol.. 170・6. 3054-3058 (2003)

Arase, N.：“IgE 通过 Fc γ RIII 介导的 NK 细胞激活。”J.Immunol.. 170・6 (2003)。

Lodoen, M.: "NKG2D-mediated natural killer cell protection against cytomegalovirus is impaired by viral gp40 modulation of retinoic acid early inducible 1 gene molecules."J.Exp.Med.. 197・10. 1245-1253 (2003)

Lodoen, M.：“NKG2D 介导的针对巨细胞病毒的自然杀伤细胞保护受到视黄酸早期诱导 1 基因分子的病毒 gp40 调节的损害。”J.Exp.Med. 197・10 (2003)。

Shiratori, I.: "Activation of Natural Killer Cells and Dendritic Cells upon Recognition of a Novel CD99-like Ligand by Paired Immunoglobulin-like Type 2 Receptor."J.Exp.Med.. 199・4. 525-533 (2004)

白鸟 I.：“配对免疫球蛋白样 2 型受体识别新型 CD99 样配体后的自然杀伤细胞和树突状细胞的激活”，J.Exp.Med. 199・4。

Sakurai, D.: "FcεRIγ-immunoreceptor tyrosine-based activation motif is differentially required for mast cell function in vivo."J.Immunol.. 172・4. 2374-2381 (2004)

Sakurai, D.：“体内肥大细胞功能需要基于 FcεRIγ-免疫受体酪氨酸的激活基序。J.Immunol.. 2374-2381 (2004)”

Arase, H.: "Specific recognition of virus-infected cells by paired NK receptors."Rev.Med.Virol.. (in press).

Arase, H.：“配对 NK 受体对病毒感染细胞的特异性识别。”Rev.Med.Virol..（正在出版）。