新たな遺伝子クローニングシステムNACSを応用した疾患遺伝子の同定

使用新基因克隆系统 NACS 鉴定疾病基因

• 批准号: 15012208
• 负责人: 荒瀬 尚
• 金额: $ 3.78万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15012208/
• 关键词: cDNAライブラリー; レトロウィルス; リンパ球; ITAM; リン酸化; シグナル伝達; エストロジェンレセプター; CD8

私どもは、新たな機能的遺伝子クローニングシステムとしてNACS法(NFAT Activating Molecule Cloning System)を開発した.本研究では、NACS法の応用法を開発することによって、新たな細胞活性化機構、細胞分化機構の解明を目指し、それを基にヒト疾患遺伝子を明らかにすることを目的とし、今年度より本研究班で研究を始めた。NACS法では、ランダムプライマーで作成したcDNAライブラリーとCD8分子の細胞外領域とのキメラが作られるライブラリーを作製することになるため、cDNAライブラリーの質が、決定的に重要である。そこで、本年度ではまず、cDNAライブラリーの質を高めるために、cDNAの合成条件を検討した。今までのライブラリーでは、cDNAの合成長が長過ぎるために、翻訳開始点より上流からCD8とのキメラになっているクローンが多く、そのために、目的の遺伝子がクローニングできない欠点が認められた。そこで、cDNA合成の際に、ランダムプライマーの濃度を通常の50倍程度にすることにより、比較的小さいサイズのCD8キメラライブラリーを作成することに成功した。実際、新たに作成したライブラリーでスクリーニングすることにより、今までにクローニングできなかったCD3ζ等の既知のITAMを有する分子のほか、新たな4回膜貫通型の活性化制御分子をクローニングすることに成功した。そこで、本研究では、今回確立した、ライブラリー作成方法を基に、さらに、他の組織のライブラリーの作成を進めるほか、エストロジェンレセプターとのキメラライブラリーを作成することにより、転写因子等の新たな、リンパ球活性化制御分子のクローニング方法の確率を目指す。

Private ど も は, new た な function's son 伝 ク ロ ー ニ ン グ シ ス テ ム と し て NACS method (NFAT Activating Molecule Cloning System) を open 発 し た. This study で は, NACS の 応 usage を open 発 す る こ と に よ っ て, new た な cell activation mechanism, cell differentiation の interpret を refers し, そ れ を base に ヒ ト disorders heritage 伝 son を Ming ら か に す る こ と を purpose と し, our よ り beginning this seminar で study を め た. NACS method で は, ラ ン ダ ム プ ラ イ マ ー で made し た cDNA ラ イ ブ ラ リ ー と CD8 molecular の extracellular domain と の キ メ ラ が as ら れ る ラ イ ブ ラ リ ー を cropping す る こ と に な る た め, cDNA ラ イ ブ ラ リ ー の が, decided to に important で あ る. そ こ で, this year's で は ま ず, cDNA ラ イ ブ ラ リ ー の を high quality め る た め に, cDNA の synthesis condition を 検 please し た. Today ま で の ラ イ ブ ラ リ ー で は, cDNA の us growth が long ぎ る た め に, 訳 start point よ り upper か ら CD8 と の キ メ ラ に な っ て い る ク ロ ー ン が く, そ の た め に, purpose の heritage 伝 son が ク ロ ー ニ ン グ で き な い points less が recognize め ら れ た. そ こ で, cDNA synthesis の interstate に, ラ ン ダ ム プ ラ イ マ ー を usually の の concentration degree of 50 times に す る こ と に よ り, comparison of small さ い サ イ ズ の CD8 キ メ ラ ラ イ ブ ラ リ ー を made す る こ と に successful し た. Be international, new た に made し た ラ イ ブ ラ リ ー で ス ク リ ー ニ ン グ す る こ と に よ り, today ま で に ク ロ ー ニ ン グ で き な か っ た CD3 zeta etc. の already know の ITAM を have す る molecular の ほ か, new た な type 4 back to transmembrane の activation system royal molecular を ク ロ ー ニ ン グ す る こ と に successful し た. そ こ で, this study で は, today back to establish し た, ラ イ ブ ラ リ ー consummate method を に, さ ら に, he の の ラ イ ブ ラ リ ー の made を into め る ほ か, エ ス ト ロ ジ ェ ン レ セ プ タ ー と の キ メ ラ ラ イ ブ ラ リ ー を made す る こ と に よ り, planning to write factor の new た な, リ ン パ ball activation system royal molecular の ク ロ ー ニ ン グ method The accuracy rate を refers to す.

项目成果

Arase, N.: "IgE-mediated activation of NK cells through Fc γ RIII."J.Immunol.. 170・6. 3054-3058 (2003)

Arase, N.：“IgE 通过 Fc γ RIII 介导的 NK 细胞激活。”J.Immunol.. 170・6 (2003)。

Lodoen, M.: "NKG2D-mediated natural killer cell protection against cytomegalovirus is impaired by viral gp40 modulation of retinoic acid early inducible 1 gene molecules."J.Exp.Med.. 197・10. 1245-1253 (2003)

Lodoen, M.：“NKG2D 介导的针对巨细胞病毒的自然杀伤细胞保护受到视黄酸早期诱导 1 基因分子的病毒 gp40 调节的损害。”J.Exp.Med. 197・10 (2003)。

Shiratori, I.: "Activation of Natural Killer Cells and Dendritic Cells upon Recognition of a Novel CD99-like Ligand by Paired Immunoglobulin-like Type 2 Receptor."J.Exp.Med.. 199・4. 525-533 (2004)

白鸟 I.：“配对免疫球蛋白样 2 型受体识别新型 CD99 样配体后的自然杀伤细胞和树突状细胞的激活”，J.Exp.Med. 199・4。

Sakurai, D.: "FcεRIγ-immunoreceptor tyrosine-based activation motif is differentially required for mast cell function in vivo."J.Immunol.. 172・4. 2374-2381 (2004)

Sakurai, D.：“体内肥大细胞功能需要基于 FcεRIγ-免疫受体酪氨酸的激活基序。J.Immunol.. 2374-2381 (2004)”

Arase, H.: "Specific recognition of virus-infected cells by paired NK receptors."Rev.Med.Virol.. (in press).

Arase, H.：“配对 NK 受体对病毒感染细胞的特异性识别。”Rev.Med.Virol..（正在出版）。