C型肝炎ウイルスの細胞および個体免疫系修飾による持続感染成立機序の解析とその制御

细胞和个体免疫系统改造导致丙型肝炎病毒持续感染的机制分析及调控

• 批准号: 15019126
• 负责人: 小原 道法
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15019126/
• 关键词: C型肝炎ウイルス; 持続感染; 動物モデル; siRNA; 再構成ウイルス

C型肝炎ウイルスは日本でも200万人にのぼる感染者が存在することから重大かつ深刻な感染症のひとつである。HCV感染の最も深刻な問題は、感染後80〜90%の高率で持続感染化し肝細胞癌を発症することである。この持続感染機構と発癌機序を明らかにし有効な対策をたてることは重要かつ緊急の社会的要請となっている。HCVは宿主域の狭いウイルスであり、感染動物はチンパンジーのみで、より小型でハンドリングの容易な感染動物系の樹立が望まれている。ツパイは小型原猿類に分類され、A型、B型肝炎ウイルスやヘルペスウイルスなどにたいして感受性を示す報告がある。そこで、HCV患者血清とcDNAクローンからの再構成ウイルス粒子をツパイ個体に接種し、長期にわたり感染動物の経過を観察した。血清中HCV RNAは2年にわたり検出され、持続感染化した。また、接種ツパイ個体から得られたHCV-RNA陽性血清をナイーブな個体に継代接種したところ、被接種個体においても血清中HCV RNAの検出とALT値の上昇が再現された。また、2年半後には肝腫瘍の形成がみとめられた。ツパイは接種後2年を待たずにHCV感染による特徴的な病変が認められ、小型の感染モデル動物としての有用性が示された。HCVの感染病態研究に大きく寄与できるものと考えられる。さらに、HCV株間で、よく保存されている遺伝子領域の配列に対して、in vitroにて合成したsiRNAおよびプラスミドから細胞内で発現させたsiRNAを用い、感染性の全長HCV遺伝子発現細胞であるHepRzM6細胞、さらにHCVレプリコンにおけるHCV遺伝子およびHCVタンパク質に対する発現抑制効果を検討した。感染性cDNAクローンとin vitro合成siRNAあるいはプラスミド発現によるsiRNAをHepG2細胞にコ・トランスフェクションし、細胞内でのHCVタンパク発現をELISAで定量すると90%近くタンパク発現を抑制するsiRNA配列を見出した。これらの結果をもとに、HCV感染性動物として我々が独自に樹立を試みているツパイあるいはトランスジェニックマウスなどを用いたin vivoでのsiRNA活性を検討し、HCVの治療への応用を試みている。

Hepatitis C virus infection occurred in Japan, 2 million people, infected people, major infections, profound infections. HCV infection has the most profound problem, and 80% of the patients have a high rate of infection, liver cancer, liver cancer and liver cancer. In accordance with the order of the cancer mechanism of the infection mechanism, it is clear that there are policies and policies that are important and urgent for the society. The HCV host area is narrow, the infected animals are not infected, and the infected animals are easy to infect. Small apes are classified as hepatitis A, hepatitis B, hepatitis B, hepatitis A, hepatitis B, hepatitis B, hepatitis An and hepatitis B. The serum samples of patients with acute respiratory syndrome and HCV were inoculated into cDNA particles, and the infected animals were infected for a long time. The serum HCV RNA was infected for 2 years and remained infectious. The sera of the recipients were inoculated with positive HCV-RNA sera, and the sera of the recipients were inoculated with HCV RNA from the sera of the recipients, and the virus was detected again in the sera of the recipients. Two-and-a-half years later, the liver was broken to form a baby. Two years after receiving HCV infection, the patients were infected with specific diseases, small infections, animals, usefulness, and so on. The study on the state of HCV infection was sent to the hospital in the first place. In the field of HepRzM6, HCV, HCV, and in vitro, it was synthesized by in vitro. The results showed that siRNA was used in the cell, the whole length of the infectious HepRzM6 was detected in the cell, the HepRzM6 cell was isolated in the cell, the HCV in the cell was detected, and the effect of inhibition was detected. Infectious cDNA infection: in vitro synthesis, siRNA synthesis, HepG2 synthesis, HepG2 cell infection, intracellular HCV, ELISA quantification, inhibition, inhibition, and so on. The results showed that the infectious agents of HCV and I were not allowed to stand alone. They were treated with in vivo, siRNA, and HCV respectively.

项目成果

Takaku, S.: "Induction of hepatic injury by HCV structural protein-specific CD8^+ class I MHC molecule-restricted murine CTLs in transgenic mice expressing the HCV structural genes."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 301. 330-337 (2003)

Takaku, S.：“在表达 HCV 结构基因的转基因小鼠中，HCV 结构蛋白特异性 CD8^ I 类 MHC 分子限制性小鼠 CTL 诱导肝损伤。”Biochem.Biophys.Res.Commun. 301. 330-337

渡邊 綱正: "遺伝子医学2"メディカル ドウ. 5 (2003)

渡边纲政：《基因医学2》医学堂5 (2003)。

Daiba, A.: "A low-density cDNA microarray with a unique reference RNA : Pattern recognition analysis for IFN efficacy prediction to HCV as a model."Biochem.Biophys.Res.Commun.. (in press). (2004)

Daiba, A.：“具有独特参考 RNA 的低密度 cDNA 微阵列：以 HCV 为模型进行 IFN 功效预测的模式识别分析。”Biochem.Biophys.Res.Commun.（正在出版）。

Suzuki, K.: "Adenovirus-mediated gene transfer of interferon α improves dimethylnitrosamine induced liver cirrhosis in rat model."Gene Therapy. 10. 765-773 (2003)

Suzuki, K.：“腺病毒介导的干扰素 α 基因转移改善了大鼠模型中二甲基亚硝胺诱导的肝硬化。”基因治疗。 10. 765-773 (2003)

Tsukiyama-Kohara, K.: "Activation of the CKI-cdk-Rb-E2F pathway in full-genome hepatitis C virus expressing cells."J.Biol.Chem.. (in press). (2004)

Tsukiyama-Kohara, K.：“全基因组丙型肝炎病毒表达细胞中 CKI-cdk-Rb-E2F 通路的激活。”J.Biol.Chem..（出版中）。