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がんの免疫遺伝子治療への応用をめざしたEBウイルスベクターの開発

开发用于癌症免疫基因治疗的 EB 病毒载体

基本信息

批准号：
14030003
负责人：
神田輝
金额：
$ 3.2万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

腫瘍特異抗原遺伝子を挿入したEBウイルスを作製するための前段階として、本年度は、約170キロベースものサイズを持つEBウイルスゲノムを目的に応じて自在に改変するためのシステムの確立を目標とした。この目的でバーキットリンパ腫由来の細胞株であるAkata細胞内に存在するEBウイルスゲノムにBAC(Bacterial Artificial Chromosome、大腸菌人工染色体)ベクター配列を挿入したBACクローン(AK-BAC)を利用した。AK-BACは大腸菌内で増殖させることが可能であり、また大腸菌内で相同組換え法により迅速に改変できるという特徴を有している。実際に大腸菌内における相同組換え法を用いて、GFP遺伝子をAK-BACのB95-8株欠失領域に正確に組み込むことに成功した。この際に、EBウイルスゲノムのリピート配列などはコピー数が変化することなく安定に維持された。得られたBACクローン(AK-BAC-GFP)のDNAを大腸菌で大量調製し、Akata細胞に電気穿孔法により再導入することにより、ウイルス産生細胞を作製した。この細胞を抗イムノグロブリン抗体で処理することにより、GFP遺伝子が組み込まれた組換えEBウイルスを産生し、Bリンパ球に感染させた。その結果、Bリンパ球は不死化して、GFP蛋白質を発現する不死化Bリンパ球細胞株(lymphoblastoid cell line、LCL)が樹立された。得られたLCLのウイルス遺伝子発現パターンは、野生型と同様であった。以上の結果より、AK-BACを用いたウイルスゲノム改変システムにより、腫瘍特異抗原を発現するLCLを作製し、これを用いた免疫遺伝子治療へと応用していくことが可能と考えられた。

This year, about 170 people from all walks of life have been selected to participate in the selection of specific antigen. For this purpose, the cell lines from Akata cells were used to detect the presence of EB virus in BAC(Bacterial Artificial Chromosome, Escherichia coli Artificial Chromosome) and BAC (AK-BAC). AK-BAC is able to grow in E. coli and change its characteristics rapidly. In fact, the same group of E. coli strains was successfully used in the field of AK-BAC and B95 -8. In this case, the EB should be able to maintain the stability of the system. The DNA of AK-BAC-GFP was obtained from Escherichia coli by mass modulation, Akata cells by electroporation, and reintroduced into Akata cells. These cells are infected with anti-virus antibodies, such as GFP, which are used in cell culture. As a result, B cells were not killed, GFP protein was produced, and B cells were established in lymphoblast cell line (LCL). LCL is the same as wild type. The above results show that AK-BAC can be used to control the development of tumor specific antigens.