肝がんで過剰発現しているHSCOとガンキリンを標的とするがん治療法の開発

开发针对肝癌中过度表达的 HSCO 和 gankyrin 的癌症疗法

• 批准号: 15025231
• 负责人: 藤田 潤
• 金额: $ 3.2万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15025231/
• 关键词: 肝がん; がん遺伝子; ガンキリン; HSCO; MAGE; プロテアソーム; アポトーシス

1.HSCOの過剰発現が抗アポトーシス作用を示す機序を解析し、がん抑制タンパク質p53の発現には影響を与えないが、転写因子活性を抑制することを見出した。2.HSCOの活性を抑制するようなHSCO変異体の作成を試みた。C端又はN端を10アミノ酸削ると、強い細胞死の誘導活性が認められた。この時、カスパーゼ3が活性化されており、アポトーシスであった。これは細胞質において変異タンパク質が凝集体aggresomeを作ることに関連すると考えられた。凝集体形成及びアポトーシスは、肝細胞癌で発現亢進している分子シャペロンAPG-2の高発現により抑制された.3.ガンキリンと結合するMAGE-A4全長は、細胞増殖に影響を与えないが、そのN端210アミノ酸を削るとアポトーシス誘導効果の強い変異体となることを見出した。これは、BcL-xLの発現抑制、p53タンパク質の増加、Miz-1との結合によるp21転写の阻害等を介していた。ヒト細胞中でも、間接的にカスパーゼを介した機序により類似の分子がMAGE-A4全長から産生されること、DNA損傷によりその量が増えることを見出した。マウス個体への移植腫瘍にMAGE-A4変異体を投与すると、腫瘍増殖の抑制が見られた。抗がん剤としての可能性及び正常MAGE-A4の生理機能が示唆された。4.ガンキリンがMdm2と直接結合し、p53の量を減らすことを見出した。ガンキリンmRNAに対するRNAiをがん細胞株(U-2OS、Huh-7)の培地に添加したところ、アポトーシスが誘導され、増殖が50%抑制された。5.X線結晶回折によりヒトガンキリンの構造を明らかにした。アンキリンリピートの数は、アミノ酸配列から推定していた6個ではなく7個であった。

1. HSCO の before turning 発 が now fight ア ポ ト ー シ を ス role す machine sequence analytical し を, が ん inhibit タ ン パ ク qualitative p53 の 発 now に は influence を and え な い が, planning to write factor inhibition す を る こ と を shows し た. 2.HSCO <s:1> activity を inhibits するようなHSCO variant <e:1> to prepare を test みた. The C-terminus also has を n-terminus を10ア ノ ノ acid reduction ると, strong <s:1> cell death <s:1> inducing activity が recognition められた. When the <s:1> is <s:1>, カスパ カスパ ゼ ゼ3が is activated されてお, アポト シスであった シスであった シスであった. こ れ は cytoplasm に お い て - different タ ン パ ク qualitative が coagulation collective aggresome を as る こ と に masato even す る と exam え ら れ た. Clot formation and collective び ア ポ ト ー シ ス は, hepatocellular carcinoma で 発 now hyperthyroidism し て い る molecular シ ャ ペ ロ ン high APG - 2 の 発 now に よ り inhibit さ れ た. 3. ガ ン キ リ ン と combining す る MAGE - A4 span は, cell に influence を rights colonization and え な い が, そ の n-terminal 210 ア ミ を ノ acid peel る と ア ポ ト ー シ ス induced strong working fruit の い variations The body となる となる とを is seen in た. こ れ は, BcL - xL の 発 inhibition, p53 タ ン パ ク quality の raised plus, Miz - 1 と の combining に よ る p21 planning write の resistance against を interfaces such as し て い た. ヒ ト cells で も, indirect に カ ス パ ー ゼ を interface し た machine sequence に よ り similar molecular が の MAGE - A4 span か ら produce さ れ る こ と, DNA damage に よ り そ の quantity が raised え る こ と を shows し た. Youdaoplaceholder1 ウス individual へ <s:1> transplanted abscess にMAGE-A4 variant を administration すると abscess growth <s:1> inhibition が see られた. The possibility of antiが ん と <s:1> て <s:1> and び normal MAGE-A4 <s:1> physiological function が indicates された. 4. The direct combination of ガ キリ キリ が がMdm2と and the reduction of を and p53 <s:1> quantities らす reveals た た. ガ ン キ リ ン mRNA に す seaborne る RNAi を が ん cell line (U - 2 OS, Huh - 7) の petty に add し た と こ ろ, ア ポ ト ー シ ス が induced さ れ, raised colonization が 50% inhibition さ れ た. 5. X-ray crystallization refolding によ ヒトガ キリ キリ キリ <e:1> <s:1> structure を Ming ら に に た た. ア ン キ リ ン リ ピ ー ト の は, ア ミ ノ acid with column か ら presumption し て い た six で は な く seven で あ っ た.

项目成果

Gotoh, K.: "Apg-2 has a chaperone-like activity similar to Hsp110 and is overexpressed in hepatocellular carcinomas."FEBS Lett.. 560. 19-24 (2004)

Gotoh, K.：“Apg-2 具有与 Hsp110 类似的伴侣活性，并且在肝细胞癌中过度表达。”FEBS Lett.. 560. 19-24 (2004)

Sakurai, T.: "A cleaved form of MAGE-A4 binds to Miz-1 and induces apoptosis in human cells"J.Biol.Chem.. (印刷中). (2004)

Sakurai, T.：“MAGE-A4 的裂解形式与 Miz-1 结合并诱导人类细胞凋亡”J.Biol.Chem..（出版中）（2004 年）。

Yamaguchi, K.: "Engineered LTRs of retroviral vectors enhance transgene expression in hepatocytes in vitro and in vivo."Mol.Ther.. 8. 796-803 (2003)

Yamaguchi, K.：“逆转录病毒载体的工程化 LTR 增强肝细胞体外和体内转基因表达。”Mol.Ther.. 8. 796-803 (2003)

Krzywda, S.: "The crystal structure of gankyrin, an oncoprotein found in complexes with CDK4, a 19 S proteasomal ATPase regulator and the tumor suppressors Rb and p53."J.Biol.Chem.. 279. 1546-1552 (2004)

Krzywda, S.：“gankyrin 的晶体结构，这是一种在与 CDK4、19 S 蛋白酶体 ATP 酶调节剂以及肿瘤抑制因子 Rb 和 p53 复合物中发现的癌蛋白。”J.Biol.Chem.. 279. 1546-1552 (2004)

Iwai, A.: "Role of a novel oncogenic protein, gankyrin, in hepatocyte proliferation."J.Gastroenterol.. 38. 751-758 (2003)

Iwai, A.：“一种新型致癌蛋白 gankyrin 在肝细胞增殖中的作用。”J.Gastroenterol.. 38. 751-758 (2003)