新しいがん遺伝子検出用細胞の確立

新型癌症基因检测细胞的建立

• 批准号: 03152074
• 负责人: 三好 淳
• 金额: $ 3.58万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 1991
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03152074/
• 关键词: cotがん遺伝子; SHOK細胞; DNAトランスフェクション; プロティンキナ-ゼ; 分子生物学

マウスNIH3T3細胞とは異なる性質を有するがん遺伝子検索細胞としてSHOK細胞系を確立し、約150例のヒトおよびマウス腸瘍DNAを用いて、新たながん遺伝子を検索した。その結果、ヒト甲状腺癌細胞、ヒト大腸癌組織および遺伝性マウス肉腸組織の3例から、独立にcotがん遺伝子を検出した。これらは、SHOK細胞に対してNIH3T3細胞より高い形質転換能を示し、その遺伝子構造と機能を解析することは、SHOK細胞の有用性を理解する上で重要と思われた。ヒト甲状腺癌由来のcotがん遺伝子cDNAは、protein kinase群遺伝子と43ー45%の類似性を有する分子量52kDの蛋白をコ-ドしていた。cDNA塩基配列をもとに作成した合成ペプチドに対する抗体を用いてin vitroの自己リン酸化活性を検出し、cotがん遺伝子が、mos,raf,pimlに続く第4のserine/threonine protein kinase系がん遺伝子であることを明らかにした。また、ヒト胎盤DNAからcot protoーoncogeneをクロ-ニングし、exon領域のDNA塩基配列を比較した結果、cotがん遺伝子では第6coding exon内でのrearrangement、大腸癌由来のCTー12 cotでは第7exon領域の欠損が見いだされた。いずれの場合にも、正常cot遺伝子産物のC末端側でtruncationが生じており、cotがん遺伝子の活性化は、この領域に局在するkinase活性制御domainの機能欠損による可能性が考えられた。実験マウスを用いて発癌過程におけるcot遺伝子の関与を解析する目的で、マウスcot遺伝子のゲノムDNA及びcDNAをクロ-ニングした。マウスcot遺伝子は、ヒトcot遺伝子と93.3%の類似性を示す467アミノ酸の蛋白をコ-ドし、exon/intron境界部は両者で完全に一致した。また、成熟マウスでは、胸腺、脾臓、甲状腺の3つの臓器で発現が認められた。今後、gene targeting等の手法を用いて詳細な解析を続けたい。

The NIH3T3 cell line was confirmed in about 150 cases, and the DNA was used in some cases, and the new one was used in the first place. The results showed that there were 3 cases of thyroid cancer, 3 cases of thyroid cancer, and 3 cases of thyroid cancer, and 3 cases of thyroid cancer, 3 cases of thyroid cancer and 3 cases of thyroid cancer. The data of the SHOK cell, the NIH3T3 cell, the computer, the computer, the SHOK cell, the usefulness and the understanding of the cell are important. The cause of thyroid cancer is cot, cDNA, protein kinase group, 43, 45%, similarity, molecular weight, 52kD, protein, protein. The cDNA-based array of antibodies was made to synthesize the antibodies by using the in vitro, the acidizing activity, the acidizing activity, the mos,raf,piml, the 4th serine/threonine protein kinase family, the antibody, the antibody. Pregnancy, pregnancy, DNA, cot proto, oncogene, exon, exon, DNA, coding, exon, cancer, CT, 12, 12, 7, 6, 12, 12, 6, 6, 12, 12, 24, 12, 12, 24, 12, 12, 12, 24, 12, 12, 12, 24, 12, 12, 12, and 7, respectively. In the production of normal cot, the C-terminal of the truncation is active, the domain is activated, and the field bureau is responsible for the possibility that the domain machine is not active. The purpose of this study is to analyze the purpose of the cot, cot the DNA and the cDNA information. The similarity of the cot child, the cot child and the exon/intron realm is exactly the same. The organs of the thymus, spleen, thyroid gland, thymus, spleen, thyroid gland, spleen, thyroid gland, thymus, spleen and thyroid gland. From now on, gene targeting and other techniques are used to analyze the problem.

项目成果

J.Miyoshi,: "Structure and transforming potential of the human cot oncogene encoding a putative protein kinase." Mol.Cell.Biol.11. 4088-4096 (1991)

J.Miyoshi：“编码假定蛋白激酶的人类致癌基因的结构和转化潜力。”

T,Ohuchi,: "Oncogenic activation of murine mos protein kinase by DNA rearrangement of its N-terminal codig region." Oncogene.

T,Ohuchi，：“通过 N 末端 codig 区域的 DNA 重排来致癌激活小鼠 mos 蛋白激酶。”

S.Orita,: "A novel point mutation at codon 146 of the K-ras gene in a human colorectal cancer identified by the polymerase chain reaction." Virus Genes. 5. 75-79 (1991)

S.Orita：“通过聚合酶链反应鉴定出人类结直肠癌 K-ras 基因密码子 146 处的新点突变。”

K,Suzuki,: "Differences in effects of oncogenes on resistane to γ rays,ultraviolet light,and heat shock." Radiation Research. 129. 157-162 (1992)

K，Suzuki，：“致癌基因对 γ 射线、紫外线和热休克的抵抗力的差异。辐射研究”129。157-162（1992）

M.Aoki,: "Identification and characterization of protein products of the cot oncogene with serine kinase activity." Oncogene. 6. 1515-1519 (1991)

M.Aoki，：“具有丝氨酸激酶活性的 cot 癌基因蛋白质产物的鉴定和表征。”