新しいがん遺伝子検索用細胞の確立

建立新的癌症基因搜索细胞

• 批准号: 02152067
• 负责人: 三好 淳
• 金额: $ 3.26万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 1991
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02152067/
• 关键词: がん遺伝子; <cot>___ー遺伝子; タンパク質キナ-ゼ; ハムスタ-SHOK細胞; DNAトランスフェクション; 形質転換; 甲状腺がん; 遺伝子クロ-ニング

本研究の一環として、ハムスタ-SHOK細胞系を確立した。本年度は、これを用いてヒト甲状腺癌細胞より分離された新しいがん遺伝子<cot>___ーの生化学的活性とその活性化機構を明らかにした。<cot>___ーがん遺伝子のcDNA塩基配列から予想される蛋白は、protein kinase群と43ー45%の類似性を有し、Kinase活性に必須と考えられている15のアミノ酸を保存していることが分かっていた。そこで、この蛋白のKinase活性を検出するため2通りの解析を行なった。第一に、<cot>___ーがん蛋白のN末端側にネコ肉腫ウイルスGRーFeSVの<gag>___ー遺伝子産物を融合させたキメラ遺伝子を試験管内で作成し、<gag>___ー蛋白に対する抗体を利用して、形質転換細胞の抽出液中の<gag>___ーー<cot>___ー融合蛋白P60を免疫沈降させ、in vitro自己リン酸化活性を見いだした。第二に、cot蛋白のN末端とC末端側に対応する合成ペプチドに対する抗体を用いて、同様にcot蛋白P52の自己リン酸化活性を検出した。いずれの場合も、自己リン酸化はserine残基に生じており、<cot>___ーがん遺伝子はscrine/thrconine kinase系のがん遺伝子であることが明らかになった。<cot>___ーがん遺伝子の活性化機構を解明するために、ヒト胎盤DNA、甲状腺がん細胞、およびSHOK形質転換細胞における<cot>___ー遺伝子の構造および8個のexonの全DNA塩基配列を比較した。その結果、ヒト胎盤DNAと甲状腺癌細胞における<cot>___ー遺伝子の構造には変化が認められないのに対し、<cot>___ーがん遺伝子では、3'領域の組換部位が第8exon内に存在することが分かった。従って、<cot>___ーがん遺伝子産物は正常<cot>___ー遺伝子産物のC'ーterminal truncationを受けたものに相当すること、また、<cot>___ーがん遺伝子の活性化は、甲状腺がん細胞DNAのSHOK細胞へのtransfectionに際して生じたものであることが明らかになった。

In this study, a と て て and ハムスタ-SHOK cell line を were established to confirm. This year は, こ れ を with い て ヒ ト thyroid cancer よ り separation さ れ た new し い が ん heritage 伝 child < cot > ___ ー の biochemical active と そ の activeness institutions を Ming ら か に し た. < cot > ___ ー が ん posthumous son 伝 の cDNA salt base with column か ら to think さ れ る は of protein, protein kinase group of 43 ー と の 45% similarity を し, kinase activity に must と え ら れ て い る 15 の ア ミ ノ acid を save し て い る こ と が points か っ て い た. Youdaoplaceholder0 そ で で, the activity of <s:1> Kinase of <s:1> proteins を検 output するため2 lines of analysis を line なった. First に, < cot > ___ ー が ん protein の N terminal side に ネ コ meat swollen ウ イ ル ス GR ー FeSV の < gag > ___ ー heritage 伝 zi chan content を fusion さ せ た キ メ ラ posthumous son 伝 を test tube で make し, < gag > ___ ー protein に す seaborne る antibody を using し て, form quality planning in cell の extract in の < gag > ___ ー ー <cot>___ <s:1> fusion protein P60を immune degradation させ, in vitro its own リ <s:1> acidification activity を see だ だ た た. Second に, cot protein の と C N end end side に 応 seaborne す る synthetic ペ プ チ ド に す seaborne を る antibody with い て, with others in に cot protein P52 の himself リ ン acidification active を 検 out し た. い ず れ も の occasions, his リ ン acidification は serine residues に raw じ て お り, < cot > ___ ー が ん posthumous son 伝 は scrine/thrconine kinase is の が ん heritage 伝 son で あ る こ と が Ming ら か に な っ た. < cot > ___ ー が ん posthumous son 伝 の activeness institutions を interpret す る た め に, ヒ ト placenta DNA, thyroid が ん cells, お よ び SHOK form quality planning in cell に お け る < cot > ___ ー posthumous son 伝 の tectonic お よ び eight の exon の DNA salt base full column を compare し た. そ の results, ヒ ト placenta と thyroid cancer cell DNA に お け る < cot > ___ ー posthumous son 伝 の tectonic に は variations change が recognize め ら れ な い の に し seaborne, < cot > ___ ー が ん posthumous son 伝 で は, 3 'domain の group change parts が に exist within exon 8 す る こ と が points か っ た. 従 っ て, < cot > ___ ー が ん heritage 伝 zi chan content は normal < cot > ___ ー heritage 伝 zi chan content の C 'ー terminal Truncation を by け た も の に quite す る こ と, ま た, < cot > ___ ー が ん posthumous son 伝 の activeness は, thyroid が ん cell DNA の SHOK cells へ の transfection に interstate し て raw じ た も の で あ る こ と が Ming ら か に な っ た.

项目成果

Terada,N.,et al.: "Alteration of Nー<ras>___ー gene mutation after relapse in acute lymphoblastic leukemia." Blood. 75. 453-457 (1990)

Terada, N. 等人：“急性淋巴细胞白血病复发后 Nー<ras>____ 基因突变的改变。”75. 453-457 (1990)

Orita,S.,et al.,: "A novel point mutation at codon 146 of the Kー<ras>___ー gene in a human colorectal cancer identified by the polymerase chain reaction." Virus genes. 5. 75-79 (1991)

Orita,S.,et al.,：“通过聚合酶链反应鉴定出人类结直肠癌 K-<ras>___- 基因密码子 146 处的新点突变。”5. 75-79（ 1991)

Miyoshi,J.,et al.,: "Structure and transforming potential of the human <cot>___ー oncogene encoding a putative protein kinase." Mol.Cell.Biol.

Miyoshi, J. 等人：“人类 <cot>___ 的结构和转化潜力 - 编码假定蛋白激酶的癌基因。”

Higashi,T.,et al.: "Hamster cell line suitable for transfection assay of transforming genes." Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.87. 2409-2413 (1990)

Higashi,T.,et al.：“适合转化基因转染测定的仓鼠细胞系。”