相同組換え遺伝子導入による発癌機構の研究

同源重组基因导入致癌机制研究

基本信息

批准号：
04151021
负责人：
井川洋二
金额：
$ 12.16万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至 1993
项目状态：
已结题

项目摘要

本班の研究は、相同組換え研究技術開発の面とこれら技術を駆使して、ES細胞でがん化に関連する遺伝子に欠損を導入し、そのES細胞由来のマウスを得て、遺伝子の機能をマウス個体レベルで研究する面とがある。井川はC57BL/6 ×CBAのF_1胚由来のES細胞系(TT2)を用いて、Neor遺伝子とヂフテリア毒素A遺伝子による二重選択法を確立し、高い相同組換え率(5%程度)を得、8細胞期の正常胚に10個ほど注入し、同操作ES細胞由来のマウスを確率高く作出し、種々の遺伝子を欠損させたマウスを得た。p53遺伝子欠損マウスでは、ある操作ESクローン由来のマウスは生後3か月程度でほぼ100%リンパ腫を発症させ、同マウス由来の細胞系が上皮細胞系を含め容易に樹立されることを観察した。権藤は、勝木らの協力により二段階相同組換えを用いた新しい遺伝子置換法を確立した。第一段階にはNeor遺伝子とHSV-tK遺伝子を用いNeo耐性GANC感受性操作ES細胞を選択し、第二段階ではlac Z遺伝子と置換する遺伝子を並べて導入して相同組換え体をGANC抵抗性で選択する。この方法で、点変異導入p53遺伝子の導入を試みた。高橋は、Hox3.5,3.6遺伝子のES細胞組換え体を得た。若杉はMCC遺伝子を変異させたESクローンを数個得た。城石は、野生マウスWm7染色体と近交系由来の染色体の間で相同染色体間組換えを起こしたMHC領域内組換え系統を作成し、可視突然変異を確認した上で、それらからES細胞系13株を樹立した。野田はマウスゲノム型APC遺伝子を単離して変異を入れ、ES細胞での相同組換えを利用して、変異APC遺伝子を持つマウスを得た。中辻は、8日マウス胚からの始原生殖細胞の体外培養法を改良し、6日間増殖・維持した。八木は、ES細胞における相同組換えでFyn欠損マウスを得、神経系形成(特にCA3領域)異常、哺乳行動異常を観察した。

该小组的研究涉及开发同源重组研究和技术，并使用这些技术，引入了与ES细胞中癌症发育相关的基因缺陷，从这些ES细胞中获得的小鼠，并研究小鼠个体水平的基因功能。 Igawa使用NEOR基因和白喉毒素A基因建立了一种双重选择方法，该方法使用源自C57BL/6 x CBA的F_1胚胎得出的ES细胞系（TT2）获得了高度同源重组速率（约5％），并在8型阶段中注射了大约10个正常栓塞的示例，并在8cell阶段中注射出较大的empryos，并源于8cell阶段，并衍生出较高的较大型号，并衍生出较高的较大型号，并衍生出较高的ex exteriper，并衍生出较高的ex exteriper sefersiper，并衍生出较高的ex exteriper sefersiper sefersiper，并获得了衍生的均匀型号。小鼠缺乏各种基因。在缺乏p53基因的小鼠中，源自某些工程ES克隆的小鼠在大约3个月大的时候就产生了几乎100％的淋巴瘤，并且观察到很容易建立从同一小鼠衍生的细胞系，包括上皮细胞系。随着Katsuki等人的合作，Gondo使用两阶段的同源重组建立了一种新的基因替代方法。在第一阶段，使用Neor基因和HSV-TK基因选择新耐药的GAN敏感性ES细胞，在第二阶段，将用LAC Z基因代替的基因并排引入以选择GANC抗性的选择同源重组。该方法用于引入点诱变p53基因。高桥获得了HOX3.5和3.6基因的ES细胞重组者。 Wakasugi获得了几种突变MCC基因的ES克隆。 Shiroishi创建了一个MHC内部重组线，该线经历了野生小鼠WM7染色体和近层染色体之间的同源互色体重组，证实了可见的突变，并从这些线中确定了13个ES细胞系。 NODA分离了小鼠基因组APC基因并将其突变，并在ES细胞中使用同源重组来获得携带突变APC基因的小鼠。 Nakatsuji在第8天改善了小鼠胚胎的原始生殖细胞的体外培养方法，并进行了6天。 Yagi通过ES细胞中的同源重组获得了缺陷的小鼠，并观察到神经系统形成（尤其是在CA3区域）和哺乳动物行为异常的异常。