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温度感受性変異p53遺伝子を持つマウス赤白血病細胞の生物特性

携带温度敏感突变p53基因的小鼠红白血病细胞的生物学特性

基本信息

批准号：
08265218
负责人：
井川洋二
金额：
$ 2.56万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

フレンドウイルスgp55遺伝子導入トランスジェニックマウス由来の赤白血病細胞系より温度感受性変異p53(p53^<val-135>)遺伝子を発現する赤白血病細胞株を樹立し、その亜株(El-gp55-1-2-3)を分離した。同細胞株では変異p53は細胞質に局在するが、温度シフトにより野生型p53の発現を誘導するとp53は核内に移行し標的DNAに結合する。即ち、1-2-3細胞を37℃、あるいは32℃で培養した後、抗p53モノクローナル抗体(PAb421)を用いて免疫染色を行った。37℃では細胞質が、32℃では核が染色された。さらに、野生型p53の発現に伴いこの赤白血病細胞系の細胞増殖能が顕著に低下し、アポトーシスが誘導されることを明らかにした。即ち、32℃で培養した場合アポトーシス特徴的な染色体DNAの断片化が観察された。またこの時、細胞周期制御に関与するp21、gadd45、およびcyclin Gの発現は活性化されるが、アポトーシス関連遺伝子bcl-2、bax、fas、およびfas ligandの発現上昇は認められないことを再現性よく確認した。p53遺伝子変異により細胞周期制御に関与する遺伝子の機能が抑制され、細胞の腫瘍性が維持される可能性が示唆された。この細胞系の腫瘍増殖シグナルはgp55が結合するEPORの下流にあるが、検索した結果JAK1,STAT5が恒常的にチロシン燐酸化していることが明かになった。しかしSTAT5は核内移行ができず、他の経路のシグナルを用いている可能性が示唆された。

A leukemic cell line derived from the introduction of a temperature-sensitive variant p53(p53^ ) gene was <val-135>established and isolated from a leukemic cell line (El-gp55-1-2-3). Different p53 in the same cell line can be induced by cytoplasmic changes, temperature changes, induction of wild-type p53, migration of p53 into the nucleus, and binding of target DNA. 1-2-3 cells were cultured at 37℃ and 32℃, and then immunostained with anti-p53 antibody (PAb421). 37℃ for cytoplasm, 32℃ for nucleus staining. The development of wild-type p53 in leukemia cell lines is accompanied by a decrease in cell proliferation and induction. That is, chromosome DNA fragmentation was observed when cultured at 32℃. The expression of bcl-2, bax, fas, and cyclin G in cell cycle regulation was determined by the reproducibility of bcl-2, bax, fas and cyclin G. p53 gene mutation is related to cell cycle regulation and the possibility of gene function inhibition and cell proliferation maintenance is discussed. The proliferation of these cell lines was characterized by consistent phosphorylation of JAK1, STAT5 in the downstream of EPOR binding to gp55. STAT5 shows the possibility of nuclear migration and the use of other pathways.