相同組換え遺伝子導入による発癌機構の研究

同源重组基因导入致癌机制研究

基本信息

批准号：
05151024
负责人：
井川洋二
金额：
$ 12.8万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

当班の研究目標は、相同組換えの効率を高めるために、胚性幹(ES)細胞系、標的遺伝子導入用ベクター系の開発を進めると共に、その技術を駆使してがん遺伝子、がん抑制遺伝子等を欠失したマウス系統を作出し、それら遺伝子の個体レベルでの機能を探ることにある。井川らは、8細胞期胚への挿入で高いマウス個体形成能を示すES細胞系TT2および相同組換えES細胞クローンの選択にジフテリア毒素A断片(DT-A)遺伝子を用いたベクター系を開発し、それらの普及化を果した。また、それらを用いてp53遺伝子をホモに欠失したマウス系を作出し、生後12週前後での胸線リンパ腫の発症をみると共に、同マウス系由来の細胞が上皮細胞を含め不死化しやすい傾向があることを観察した。八木らは、上記の系で、fynのSH領域とキナーゼ領域を1acZで置換し、fyn機能をホモに欠失したマウス系統において、海馬など脳形成異常や哺乳などの行動異常をみた。野田らはAPC遺伝子の第15エクソンを欠失したキメラマウスを得、小腸、大腸の腺腫の誘導に成功した。高橋らは、Hox3.5、3.6遺伝子を片側欠失させたESクローンを得た。阿部らは、APC遺伝子と部分的にホモロジーを持つMCC遺伝子を欠損させたESクローンを118個得た。発生工学的手法の開発としては、城石らはMHC内に約5000倍の組換え頻度を持つマウスよりES細胞系を得た。また、権藤らは、二段階の相同組換え法を工夫し、標的遺伝子を別の遺伝子に置換する方法の確立を目指し、p53遺伝子を点変異導入p53遺伝子や1acZ遺伝子と置換させた。更に、中辻らは始原生殖細胞の培養化を試み、TNFがその増殖維持に効果があることを見出した。この系も将来相同組換えに利用できる可能性を持っている。

我们的研究目标是开发胚胎茎（ES）细胞系和矢量系统，以提高同源重组的效率，并使用该技术创建删除癌症基因，癌症抑制基因等的小鼠菌株，并探索这些基因在个体水平上的功能。 Igawa等。使用白喉毒素A片段（DT-A）基因进行了ES细胞系TT2开发了矢量系统，当插入8细胞胚胎和同源的重组ES细胞克隆时，它具有较高的小鼠个性化潜力，并将其扩散。使用这些，我们创建了一个小鼠系统，其中p53基因是同源删除的，我们观察到乳腺淋巴瘤是在出生后12周后开发的，并且来自同一小鼠系统的细胞倾向于永生化，包括上皮细胞。在上述系统中，Yagi等人。观察到的脑发育不良，例如海马和行为异常，例如小鼠菌株中的乳腺喂养，用1ACZ代替了FYN的SH和激酶区域，并同源地删除了FYN功能。 Noda等。获得了一种删除了APC基因的外显子15的嵌合小鼠，并成功诱导了小肠和大肠中的腺瘤。高桥等。获得了ES克隆，其中HOX3.5和3.6基因在一侧被删除。 Abe及其同事获得了118个ES克隆，这些克隆缺少MCC基因，这与APC基因部分同源。作为发展工程方法，Shiroishi等人。从MHC中的小鼠中获得了大约5,000倍的频率重组的ES细胞系。此外，Gondo及其同事开发了一种两步的同源重组方法，以建立一种用另一个基因代替靶基因的方法，并用点诱变p53基因和1ACZ基因代替p53基因。此外，Nakatsuji等人。试图培养原始生殖细胞，发现TNF有效地维持其增殖。该系统还有可能将来用于同源重组。