温度変異p53遺伝子を持つマウス赤白血病細胞の生物特性

p53基因温度突变小鼠红白血病细胞的生物学特性

• 批准号: 07273221
• 负责人: 井川 洋二
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07273221/
• 关键词: 温度感受性p53; 赤白血病細胞; アポトーシス; FragmentA 結合蛋白; 分化誘導

フレンドウイルスgp55遺伝子導入トランスジェニックマウス由来の赤白血病細胞系より温度感受性変異p53(p53^<val-135>)遺伝子を発現する赤白血病細胞株(1-2-3)を樹立した。同細胞株では変異p53は細胞質に局在するが、温度シフトにより野生型p53の発現を誘導するとp53は核内に移行し標的DNAに結合する。即ち、1-2-3細胞を37℃、あるいは32℃で培養した後、抗p53モノクローナル抗体(PAb421)を用いて免疫染色を行った。37℃では細胞質が、32℃では核が染色された。更に、p53結合性DNA配列を有するFragmentAをプローブとしてゲルシフト解析を行った。32℃で培養した細胞の核抽出物中にはFragmentA-蛋白質複合体が検出されたが、37℃では検出されなかった。このことから、野生型p53のみがFragmentAに結合することが明らかとなった。さらに、野生型p53の発現に伴いこの赤白血病細胞系の細胞増殖能が顕著に低下し、アポトーシスが誘導されることを明らかにした。即ち、1-2-3細胞を37℃、あるいは32℃で培養し細胞増殖速度を解析した。32℃では、著しく細胞増殖速度が低下した。また、細胞よりDNAを抽出し1.5%アガロースゲルで電気泳動し解析したところ、32℃で培養した場合アポトーシスに特徴的な染色体DNAの断片化が観察された。またこの時、細胞周期制御に関与するp21、gadd45、およびcyclin Gの発現は活性化されるが、アポトーシス関連遺伝子bcl-2、bax、fas、およびfas ligandの発現上昇は認められないことを見出した。p53遺伝子変異により細胞周期制御に関与する遺伝子の機能が抑制され、細胞の腫瘍性が維持される可能性が示唆された。更に、温度シフトにより野生型p53を発現させるとp53は核内に移行し、その細胞質内局在にはheat-shock cognate protein 70(HSC70)が関与する可能性が考えられたが、cycloheximideで処理すると、変異型p53はHSC70と結合しているにも関わらず核内へ移行するので、細胞質内局在には他の因子の介在が予測される。

The cell line of erythroleukemia, the thermosensitivity of p53 (p53 ^ & lt;val-135>), and the cell line (1-2-3) of erythroleukemia were found. The expression of p53 gene in the cell line was detected by the combination of DNA and wild-type p53 gene in the same cell line. That is, the cells of 1-2-3 cells were incubated at 37 ℃ and 32 ℃, and the anti-p53 antibody (PAb421) was detected by immunostaining. The cells were stained at 37 ℃ and nuclear staining at 32 ℃. Update and p53 combinative DNA were arranged in a column with a number of FragmentA data, which were analyzed in a row. The FragmentA- protein complex was extracted from the nuclear extract at 32 ℃ and the temperature was 37 ℃. The combination of wild-type p53 gene FragmentA and wild-type p53 gene can be used to determine the details of the disease. Both wild-type and wild-type p53 genes were found to be concomitant with erythroleukemia, and the cell colonization ability of the cell line was significantly lower than that of wild-type p53 cells. That is, 1-2-3 cell growth rate was analyzed at 37 ℃ and 32 ℃ respectively. The rate of cell proliferation was low at 32 ℃. 1. 5% of the samples were extracted from the cell DNA, and the DNA fragments of the chromosomes were analyzed by electrophoretic electrophoresis at 32 ℃ and incubated at 32 ℃. During the whole period of time, the cell cycle controls p21, gadd45, and cyclin G genes to detect the activation of bcl-2, bax, fas, fas ligand, and so on. The p53 gene is responsible for cell cycle regulation and the mechanism of cell cycle control is capable of inhibiting and abetting the possibility of maintaining sexual activity. The results of heat-shock cognate protein 70 (HSC70), cycloheximide, HSC70, and combination of p53, p53, p53.