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タンパク質のミトコンドリア移行:単一細胞レベルでのリアルタイム解析

蛋白质的线粒体易位：单细胞水平的实时分析

基本信息

批准号：
09877027
负责人：
森正敬
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ミトコンドリアタンパク質の大部分はサイトソルより輸送されるが、それらの多くはN末端側にプレ配列を持つ前駆体として合成される。輸送されたタンパク質はミトコンドリアのマトリックスに存在するプロテアーゼによるプロセシングを受け、成熟タンパク質となる。今回我々は、ミトコンドリアへのタンパク質移行のメカニズムを単一細胞レベルで解析するために、Aequorea victoria由来のgreen fluorescent protein(GFP)のN末端側にヒト・オルチニントランスカルバミラーゼ(OTC)のプレ配列を持つ融合タンパク質(pOTC-GFP)を発現するプラスミドを構築した。これをCOS-7培養細胞内へ導入し、蛍光顕微鏡による観察を行ったところ、ミトコンドリアの形態と同様な糸状の蛍光が観察された。また、移行したpOTC-GFPは本来のGFPと同じ分子量であることから、pOTC-GFPは移行の際にプロセシングを受けていることが示された。脱共役剤存在下では移行効率の著しい低下が観察された。さらに、マイクロインジェクション法を用いて、このプラスミドを培養細胞の核内に直接導入することにより、導入後約3時間でミトコンドリア様の蛍光が観察された。この系はタンパク質のミトコンドリアへの移行過程を単一細胞内でリアルタイムに観察するのに有用な系であると期待される。

ミトコンドリアタンパクqualityのmostはサイトソルより Transportationされるが、 The それらの多くはN terminal side にプレ arrangement をhold つfront 駆body としてsynthetic される. Transport the quality of the material and the quality of the materialプロテアーゼによるプロセシングをReceived, mature タンパク性となる. This time I'm going to be a 々は, ミトコンドリアへのタンパク性动のメカニズムを単一cell レベルでANALYSIS するために, Aequorea victoria origin のgreen fluorescent protein (GFP) N-terminal side にヒト・オルチニントランスカルバミラーゼ(OTC )のプレarray をholding fusion タンパクquality (pOTC-GFP) を発行するプラスミドをconstructed した. Introduced into COS-7 cultured cells, and inspected using microscopic microscopeたところ、ミトコンドリアのmorphologyと同様な糸-shapedの蛍光が観看された.また、Migration したpOTC-GFPはOriginal GFPと Same molecular weight であることから, pOTC-GFP has been transferred to the laboratory. The migration efficiency is reduced due to the presence of anti-communist agents.さらに、マイクロインジェクション methodをUsing いて、このプラスミドをCultivation of cells in the nucleus Directly import the することにより, and it will take about 3 hours after importing the でミトコンドリア様の蛍光が観看された.この性はタンパク性のミトコンドリアへのmigratory processを単一cell内でリアルタイムに観看するのに用な性であるとLooking forward to される.