アルキル化剤によるがん原性DNA変異の生起とその抑制機構

烷化剂引起的致癌DNA突变及其抑制机制

基本信息

批准号：
60010056
负责人：
関口睦夫
金额：
$ 10.24万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1985
资助国家：
日本
起止时间：
1985 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.アルキル化剤によってできたDNAの傷を修復する酵素系は大腸菌から哺乳動物の細胞にわたって普遍的に存在するが、それらの酵素のうちあるものは細胞を低濃度のアルキル化剤で処理することによって誘導されることが知られている。この機構を明らかにするため、それに関する遺伝子adaとalKAを大腸菌からクローニングして解析した。その結果adaは0-6-メチルグアニンDNAメチルトランスフェラーゼの構造遺伝子であるとともに、ada遺伝子自体およびalKA遺伝子の調節遺伝子であることが明らかになった。アルキル化剤で処理した時と正常時の細胞内でつくられるRNAを解析した結果、両遺伝子の発現は転写レベルで調節されていることがわかった。2.正常のヒトの細胞は上記メチルトランスフェラーゼ活性をもっているが、がん細胞の中にはその活性が著しく減少しているものが存在する。そのような細胞はアルキル化剤に対しても高い感受性を示す。そこで大腸菌からクローニングしたada遺伝子を哺乳動物細胞の発現ベクターpSV2neoに挿入し、それをMe【r^-】細胞(メチルトランスフェラーゼ欠損株)に導入したところ、その細胞の中に多量の大腸菌のメチルトランスフェラーゼがつくられ、細胞はMe【r^+】の表現型を示すことがわかった。3.ヒトの高発がん性遺伝病である色素性乾皮症の患者由来の細胞XP20S株にマウスのDNAを移入し、紫外線感受性が正常株に近づいた形質転換株を分離した。それからとったDNAをXP20S株に移入し、さらに二次形質転換株を分離することができた。この細胞内には特定のマウスDNAが存在するので、それを利用して遺伝子のクローニングをする途がひらけた。

1。修复由烷基化剂形成的DNA伤口的酶系统普遍存在于大肠杆菌到哺乳动物细胞，但众所周知，这些酶中的一些是通过用低浓度的烷基化剂处理细胞来诱导的。为了阐明这种机制，将与该基因相关的基因ADA和ALKA从大肠杆菌克隆并进行了分析。结果表明，ADA是0-6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶的结构基因，也是ADA基因本身和ALKA基因的调节基因。用烷基化剂处理时在细胞中产生的RNA的分析，并且在正常情况下表明两个基因的表达在转录水平上受到调节。 2。正常的人类细胞具有上述甲基转移酶活性，但一些癌细胞显着降低了其活性。这种细胞还对烷基化剂表现出较高的敏感性。然后将克隆从大肠杆菌克隆的ADA基因插入哺乳动物细胞的表达矢量PSV2Neo中，并将其引入一个Me [R^ - ]细胞（甲基转移酶缺陷型菌株）中，并发现大量大肠杆菌甲基转移酶在细胞中产生，并在细胞中产生了Me [R^r^r^+]现象。 3。将小鼠DNA转移到源自Xeroderma色素的患者的细胞XP20菌株，该菌株是人类的高度致癌遗传疾病，并转化具有紫外线敏感性接近正常菌株的菌株。然后将获得的DNA转移到XP20S菌株中，并可以进一步分离二次转化菌株。由于该细胞内存在特定的小鼠DNA，因此将系统打开以使用它来克隆基因。