DNAによる形質転換を利用したヒトや哺乳動物の遺伝子の解析

使用 DNA 转化分析人类和哺乳动物基因

基本信息

批准号：
60106007
负责人：
関口睦夫
金额：
$ 11.39万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Special Project Research
财政年份：
1985
资助国家：
日本
起止时间：
1985 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-60106007/
关键词：
形質転換遺伝子クローニング遺伝病哺乳動物培養細胞

项目摘要

細胞に外来性のDNAを移入することによりその細胞の遺伝的な性質を変える、いわゆる形質転換の実験は微生物では再現性よく実施することができるが、哺乳動物培養細胞ではその効率が低く、それを用いて遺伝子のクローニングを行うには困難があった。しかし形質転換を利用すると、たとえ遺伝子の産物が不明の場合でも目的とする遺伝子を分離することが原理的に可能であり、これによって遺伝病の解析などに大きく貢献すると考えられるので、この方法の確立と適用に努めた。まず試験管内で突然変異原などを作用させて分離したミュータント細胞に正常細胞より抽出したDNAを導入し、ミュータントの性質を正常型に形質転換する方法を確立した。この方法を用いて細胞の染色体凝縮を制御するヒトの遺伝子およびチミジル酸合成酵素の構造遺伝子をクローニングすることに成功した。特に並者は細胞増殖に必須の遺伝子であり、このような遺伝子を形質転換法を用いて成功したのは世界でも初めてのことである。この方法を用いて遺伝病に関する遺伝子を分離するには、ヒトの遺伝病の細胞にDNAを導入して形質転換を行うことが必要である。そのため色素性乾皮症やファンコニー症の細胞を用いて紫外線高感性やマイトマイシンC高感受性の抑制を指標として形質転換実験を行った。その結果一過性の感受性の抑制はみられたが、永続的な形質転換細胞は未だ得られていない。これについては現在研究を継続中である。以上の点から、所期の目標のコアの部分はほぼ達成することができた。現在この方法を用いて各種の哺乳動物ミュータント細胞の解析が本研究班の班員によって強力に展開されつつある。遺伝病細胞については未だ突破口を開くに至っていないが、現段階はそれに至る重要なステップと考えている。

所谓的转化实验可以通过将异物DNA掺入细胞中改变细胞的遗传特性，可以在微生物中重复地进行，但是在哺乳动物培养的细胞中，效率较低，因此很难使用它们克服基因。但是，使用转化，即使基因的乘积未知，也可以将目标基因分开，并且认为这对遗传疾病的分析有显着贡献，因此我们努力建立和应用这种方法。首先，建立了一种方法，将从正常细胞提取的突变细胞转化为通过作用于试管中诱变剂分离的突变细胞，并将突变特性转化为正常形式。使用这种方法，我们成功地克隆了调节细胞染色体凝结和胸苷酸合酶的结构基因的人类基因。特别是，姨妈是细胞增殖的必要基因，这是世界上第一次使用转化方法成功使用了这种基因。为了使用这种方法分离与遗传疾病有关的基因，有必要将DNA引入人类遗传疾病细胞并进行转化。因此，使用紫外线敏感性和丝裂霉素C敏感性作为指示器，使用具有静脉色素和幻想疾病的细胞进行转化实验。结果，观察到瞬时敏感性抑制，但没有获得永久转化的细胞。目前正在进行研究。从以上几点开始，我们几乎能够实现预期目标的核心部分。当前，该方法被用于强烈分析该研究小组的组成员的各种哺乳动物突变细胞。尽管我们尚未在遗传疾病细胞中取得突破，但我们认为这是朝着这一点迈出的重要一步。