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発がん抑制におけるDNA修復とアポトーシスの役割

DNA 修复和细胞凋亡在抑制癌发生中的作用

基本信息

批准号：
13214108
负责人：
関口睦夫
金额：
$ 3.9万
依托单位：
Fukuoka Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでの研究でMgmtとMlh1の各遺伝子を欠くマウスを作製し、さらに両者を交配してMgmtとMlh1遺伝子を共に欠損するマウスをつくることができた。各系統とも少なくとも10回のバッククロスをおこなって遺伝的背系をほぼ均一化することができたので、これらのマウスの肺の組織から細胞を採取し、SV40由来のトランスフォーミングベクターを移入して株化することに成功した。これらの細胞株を各種濃度のアルキル化剤MNUとMNNGで一定時間処理した後、生じるコロニー数を調べてアルキル化剤感受性のレベルを測定した。その結果、Mgmt^<-/->Mlh1^<+/+>細胞は野生型(Mgmt^<+/+>Mlh1^<+/+>)細胞に比べ著るしく高い感受性を示すことがわかった。それに対しMgmt遺伝子の有無にかかわらずMlh1^<-/->株は野生型細胞よりさらに高い抵抗性を示し、またMgmt^<-/->Mlh1^<+/->株はMgmt<-/->Mlh1^<-/->株と同じレベルの高いMNU抵抗性を示すことが認められた。野生型株がMlh1^<-/->株よりも感受性が高いのは、SV40のT抗原によってMgmt遺伝子の発現が抑えられたことによって起こる可能性があるので、野生型株にヒトMgmt cDNAを移入してMgmt遺伝子産物(修復メチルフェラーゼ蛋白)を多量にもつ細胞株を作製して調べたところ、そのMNU感受性レベルはMlh1^<-/->株とほぼ同一となることがわかった。細胞を1mM MNUで1時間処理して誘導突然変異の出現頻度をみると、野生型株では未処理の時とほぼ同じ値を示したがMgmt^<-/->Mlh1^<-/->株ではMNU処理によってほぼ10倍の上昇がみられた。Mgmt^<-/->細胞をMNUで処理するとアポトーシスの遂行に関わる酵素カスペース3が誘導されるがMgmt^<-/->Mlh1^<-/->細胞ではMNU処理後にもカスペース活性の上昇は認められないので、アポトーシスに至る過程にミスマッチ認識タンパク系(MLH1やMSH2など)が関わっていると考えられる。

In this research, the various genes of Mgmt and Mlh1 can be produced and mated, and the Mgmt and Mlh1 genes can be damaged together. Each system has a small number of 10 loops of lung tissue, and the back system of the SV40 is homogenized. The lung tissue cells of the SV40 are collected and transferred successfully. The cell lines were treated with MNU and MNNG at various concentrations for a certain period of time, and the number of cells was adjusted to determine the sensitivity of cells. As a result, Mgmt^<-/->Mlh1^<+/+> cells are more susceptible than wild-type (Mgmt^<+/+>Mlh1^<+/+>) cells. Mlh1^<-/-> strain has high resistance to MNU, Mgmt^<-/-> Mlh1 ^<+/-> strain has high resistance to MNU, Mgmt^<-/-> Mlh1 ^<-/-> strain has high resistance to MNU. Wild type strain Mlh1 ^<-/-> has high susceptibility to T antigen, SV40 has high susceptibility to T antigen. 1mM MNU treatment induced abrupt changes in the frequency of occurrence, wild-type plants, and untreated plants. The frequency of occurrence of abrupt changes increased by 10-fold in response to MNU treatment. Mgmt^<-/-> cells were treated with MNU, and the enzyme activity of Mgmt^<-/->Mlh1^<-/-> cells increased after MNU treatment.