発がん抑制におけるDNA修復とアポトーシスの役割

DNA 修复和细胞凋亡在抑制癌发生中的作用

基本信息

批准号：
13214108
负责人：
関口睦夫
金额：
$ 3.9万
依托单位：
Fukuoka Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでの研究でMgmtとMlh1の各遺伝子を欠くマウスを作製し、さらに両者を交配してMgmtとMlh1遺伝子を共に欠損するマウスをつくることができた。各系統とも少なくとも10回のバッククロスをおこなって遺伝的背系をほぼ均一化することができたので、これらのマウスの肺の組織から細胞を採取し、SV40由来のトランスフォーミングベクターを移入して株化することに成功した。これらの細胞株を各種濃度のアルキル化剤MNUとMNNGで一定時間処理した後、生じるコロニー数を調べてアルキル化剤感受性のレベルを測定した。その結果、Mgmt^<-/->Mlh1^<+/+>細胞は野生型(Mgmt^<+/+>Mlh1^<+/+>)細胞に比べ著るしく高い感受性を示すことがわかった。それに対しMgmt遺伝子の有無にかかわらずMlh1^<-/->株は野生型細胞よりさらに高い抵抗性を示し、またMgmt^<-/->Mlh1^<+/->株はMgmt<-/->Mlh1^<-/->株と同じレベルの高いMNU抵抗性を示すことが認められた。野生型株がMlh1^<-/->株よりも感受性が高いのは、SV40のT抗原によってMgmt遺伝子の発現が抑えられたことによって起こる可能性があるので、野生型株にヒトMgmt cDNAを移入してMgmt遺伝子産物(修復メチルフェラーゼ蛋白)を多量にもつ細胞株を作製して調べたところ、そのMNU感受性レベルはMlh1^<-/->株とほぼ同一となることがわかった。細胞を1mM MNUで1時間処理して誘導突然変異の出現頻度をみると、野生型株では未処理の時とほぼ同じ値を示したがMgmt^<-/->Mlh1^<-/->株ではMNU処理によってほぼ10倍の上昇がみられた。Mgmt^<-/->細胞をMNUで処理するとアポトーシスの遂行に関わる酵素カスペース3が誘導されるがMgmt^<-/->Mlh1^<-/->細胞ではMNU処理後にもカスペース活性の上昇は認められないので、アポトーシスに至る過程にミスマッチ認識タンパク系(MLH1やMSH2など)が関わっていると考えられる。

已经进行了先前的研究，以产生缺乏MGMT和MLH1基因的小鼠，并能够跨越两者，以创建缺乏MGMT和MLH1基因的小鼠。由于在每条线中至少进行了10次反交联，以使遗传性背系统几乎均匀，因此从这些小鼠的肺组织中收集细胞，并成功地转移到菌株中，转化为SV40。用各种浓度的烷基化剂MNU和MNNG处理这些细胞系，并检查发生的菌落数量以确定烷基化剂敏感性的水平。结果表明，MGMT^< - / - > MLH1^<+/+>细胞的灵敏度明显高于野生型（MGMT^<+/+> MLH1^<+/+>）细胞。相反，MLH1^< - / - >菌株具有或没有MGMT基因，比野生型细胞显示出更高的抗药性，并且发现MGMT^< - > mLH1^<+/->菌株的抗性与MGMT < - / - > MLH1^<-/ - / - / - / - / - / - >菌株相同的MNU耐药性。野生型菌株比MLH1^< - / - >菌株更敏感的原因可能是由于SV40的T抗原抑制MGMT基因的表达而引起的，因此，当我们将人类MGMT cDNA转移到野生型中，以产生野生型菌株，并产生一个细胞系列，并用大量的MGMT GENE蛋白（Replecase Mexu strientive）（Replecase Meste rection）蛋白质蛋白质蛋白质素（我们发现MED），我们发现了MOD型蛋白质，以至于我们发现了MED型蛋白质），以至于我们发现了MMGMT蛋白酶，我们是我们的菌株，我们是我们的菌株，我们是我们的MGMT型蛋白酶，我们的蛋白质是我们的菌株）如mlh1^< - / - >菌株的那样。当细胞用1 mM MNU处理1小时时，在野生型应变中观察到诱导突变的频率，如未经治疗时，但是在MGMT^< - / - > MLH1^< - / - >菌株中，在MNU治疗中观察到近10倍。使用MNU的MGMT^< - / - >细胞的处理诱导酶CASPACE 3，该酶与凋亡的执行有关，但MGMT^< - / - > MLH1^<-/ - >细胞也没有显示出MNU治疗后的CASPACE活动的增加，即使在MNU治疗后也没有涉及MISMATCH-MATCHECT-PRECTION the PROCENTION（因此，MISMATCH-PORTIACTIAD PROTIAD POTERIAD SYTONE SENS2 and MONS2）。凋亡。