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細胞成長因子の作用機構並びにその発がん遺伝子との関連の解析

细胞生长因子作用机制及其与癌基因关系分析

基本信息

批准号：
60218022
负责人：
西塚泰美
金额：
$ 12.16万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Special Project Research
财政年份：
1985
资助国家：
日本
起止时间：
1985 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞のがん化機構は細胞成長因子の情報伝達機構と密接に関連していることが明らかにされており、がん化機構の理解には正常の情報伝達機構を解明することが必須といえる。私共は細胞増殖や細胞機能の亢進を導く各種の生理活性物質の情報伝達機構において情報増幅の中心的役割を果たしている蛋白質リン酸化酵素、protein kinase Cがホルボールエステル等の発がんプロモーターの受容体として作用していることを明らかにしている。本年度は、昨年度にひき続き、正常の情報伝達機構および細胞のがん化機構におけるprotein kinase Cの機能を解明するために、本酵素に対するモノクロナル抗体の作製と、protein kinase Cの構造解析をおこない以下の成果をおさめた。即ち、protein kinase Cを大量に分離精製する方法を確立し、精製酵素を用いてマウスの免疫をくり返し、モノクロナル抗体の作製をおこない、最終的に3種類のクローンを得た。これらのモノクロナル抗体はprotein kinase Cに特異的に結合することをウェスタンブロッティング法により明らかにした。これらの抗体を用いて免疫組織化学的方法により本酵素の細胞内局在を検討した結果、protein kinase Cの細胞内分布は細胞種により異なるが、細胞質あるいは細胞内顆粒に存在し、細胞核にはほとんど存在しない。従って本酵素から細胞核への情報伝達にはもう一段の過程が存在するものと推定される。また、精製protein kinase Cを用いて本酵素の部分構造を解析し、アミノ酸配列を決定した。その結果、protein kinase Cの遺伝子クローニングをおこなうためのDNAプローブの作製が可能となり現在、DNAライブラリーよりの本酵素の遺伝子クローニングを開始している。今後、当初の計画に従い、本酵素の遺伝子クローニングを続行するとともにモノクロナル抗体を用いて正常の情報伝達機構あるいは細胞がん化機構におけるprotein kinase Cの役割の解析をおこなうことを予定している。

Cellularization mechanism and cell growth factor information transmission mechanism and close connection and connection.されており, がん化 Institution のUnderstanding にはNormal のInformation 伝达 Establishment を clarification することがといえる. Private cell proliferation, cell function enhancement, induction of various physiologically active substances, information acquisition center, information enhancement center, protein acidification enzyme, protein kinase Cがホルボールエステルwaitの発がんプロモーターのThe effect of the receptor is the same. This year's information, last year's information, normal information and information processing mechanism, cell culture mechanism, protein kinase The function of C is explained, the enzyme is produced and the antibody is produced, and the structure of protein kinase C is analyzed and the following results are obtained. That is, protein kinase The method for separating and purifying large amounts of C has been established, and the purified enzymes are used for immunity. Return of the antibody, the production of antibodies to the antibody, and the final three kinds of antibodies.これらのモノクロナルantibodyはprotein kinase Cにspecific に合することをウェスタンブロッティング法により明らかにした.これらのantibodyをUsing いてimmunohistochemistry methodによりThe enzyme is localized in the cell and the results of protein kinase C's intracellular distribution means that the cell species are different, the cytoplasm is different, the intracellular particles are present, and the nucleus is present.従って本zymeからThe cell nucleusへのinformation伝达にはもうa period of the process がexistenceするものと Presumptionされる. The purified protein kinase C was determined by analyzing the partial structure of this enzyme and analyzing the amino acid sequence. The result of その, protein kinase Cの缝子クローニングをおこなうためのDNAプローブの成がpossibleとなりNow, DNA ライブラリーよりの本zyme の伝子クローニングをstarts している. From now on, the legacy of the original plan and the legacy of this enzyme will be usedナルantibodiesを用いてNormalのinformation伝达Mechanismあるいは Cellularization mechanismにおけるprotein The analysis of kinase C's cleavage is determined by the analysis.