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小胞体のイノシトール三リン酸結合部位の固定と再構成

内质网中肌醇三磷酸结合位点的固定和重建

基本信息

批准号：
61215023
负责人：
平田雅人
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Special Project Research
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61215023/
关键词：
イノシトール三リン酸光親和性標識小胞体【Ca^(2+)】遊離

项目摘要

細胞小胞体膜上に存在するイノシトール1,4,5-三リン酸(I【P_3】)の受容体を同定するため、I【P_3】の光感受性誘導体を合成し、サポニン処理マクロファージ(S-MФ)小胞体を用いて実行した。I【P_3】誘導体の調製法は基本的には既報のとおりカルボニルジイミダゾール(CDI)を用いて行なったが、光感受性基としてはアイソトープを導入するため既報のP-アジド安息香酸(pAB)に〔【^3H】〕β-アラニンをカップルしたもの(〔【^3H】〕アジド安息香酸β-アラニン、〔【^3H】〕ABβA)を用いた。このI【P_3】-〔【^3H】〕ABβAは25〜35cpm/pmolの放射比活性を有していた。S-MФとともに光照射した後、SDS電気泳動によりタンパクを分離したところ、80K,50K,30Kの三種類の分子量の付近がラベルされた。しかし、これはカットしたゲルをカウントして得られたもので、オートラジオグラフィーにより決定されたものではない。そこで、次に光感受性基としてアジドサリチル酸β-アラニン(ASβA)を用いた。ASβAはクロラミンTを用いて【^(125)I】を酸化的に導入できる。この様にして調製したI【P_3】-〔【^(125)I】〕ASβAは100〜200cpm/pmolの放射比活性を有していた。S-MФを光照射によりラベルして、SDS電気泳動およびオートラジオグラフィーを行なったところ、分子量80〜85K,50K,27Kの三種類のタンパク質が相対的に強くラベルされていた。これらのラベルは過剰のI【P_3】の共存下で弱くなっていた(I【P_2】は無効)。I【P_3】ホスファターゼを強く阻害する2,3-ジホスホグリセレイトの共存下でも同じく三種類のタンパク質がラベルされた。これらの結果から三種類のタンパク質がI【P_3】受容体であると考えられた。さらに確認するため、細胞成分分画を行ない、これらのラベルが小胞体分画に局在しているのか、また他の細胞でも同様にラベルされるのか等について、さらに検討している。

The receptor of 1,4,5-trinitrotoluene (I [P_3]) exists on the cell membrane. The photoreceptors of I [P_3] are synthesized and processed. I [P_3]-inducer modulation method is based on the basic principle of photosensitivity, photosensitivity, and photosensitivity. It is used to introduce P-benzoates (pAB), β-benzoates (pAB). I [P_3]-[^3H] ABβA has a specific activity of 25 ~ 35cpm/pmol. After light irradiation, SDS electrokinetic separation of three kinds of molecular weights at 80K,50K, and 30K. The first time I saw him, I saw him. The second photosensitivity base is called β-adrenergic acid (ASβA). ASβA is introduced into the acid system using [^(125)I]. The specific activity of ASβA is 100 ~ 200cpm/pmol. S-M Φ has three kinds of molecular weight: 80 ~ 85 K, 50 K, 27 K, and the corresponding strong molecular weight is 80 ~ 85K,50K,27K. I [P_3] have no blue shift. I [P_3]: A strong resistance to the use of the same type of material. The result is that there are three kinds of receptors. In addition, it is confirmed that the cell composition is divided into three parts, namely, the cell composition is divided into three parts, the cell composition is divided into three parts, and the cell composition is divided into three parts.