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Cキナーゼ活性の新規化合物による分子制御機構の細胞生物学的解析

使用新化合物对 C-激酶活性的分子调节机制进行细胞生物学分析

基本信息

批准号：
62614512
负责人：
日高弘義
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62614512/
关键词：
Cキナーゼ CDNAクローンモノクローナル抗体免疫組織化学

项目摘要

運動系における情報の受容変換機構において最も重要な酵素の一と目されるCキナーゼの役割を分子生物学, 分子免疫学, 分子薬理学の3つのアプローチにより検討した. まずウサギ脳より精製したCキナーゼをもとに, 都立臨床研の鈴木部長らと共同でCキナーゼのCDNAを解析し, その全一次構造を解明した. またこのクローニングの課程でCキナーゼにはα, β, γ, δの4種の分子種が存在することを発見した. 次にこのCキナーゼの4種の遺伝子が, ハイドロキシアペタイトクロマトグラフィーにより分離されたI型, II型, III型のどのCキナーゼアイソザイムをコードするのかを明かにするため, それぞれのアイソザイムを特異的に認識するモノクロナール抗体, MC-1a, MC-2a, MC-3aを作製し得た. これらの抗体を用いて中枢神経系の免疫組織化学的検索を行ったところ, I型Cキナーゼは小脳のプルキニエ細胞, 海馬の錐体細胞等に, II型は小脳の顆粒細胞等に, III型は白質のオリゴデンドログリア細胞等に特に豊富に分布することが判明した. また脾臓や造血組織にはI型は存在せず, II型及びIII型のみが分布することが発見された. これらの結果とノーザンブロッティングによるCキナーゼのmRNAの臓器特異的発現の検討から, I型はδ, II型はα及びβ, III型はγによりコードされていると考えられた. また各抗体のエピトープ分析の結果, これらのモノクローナル抗体はいずれもCキナーゼの調節部位を認識していることが明かとなった.

The most important enzymes in the system of motor function are involved in the study of the mechanisms of information exchange, molecular biology, molecular immunology, and molecular biology. The analysis of CDNA by Suzuki, Minister of Clinical Research, and the analysis of all primary structures The four molecular species α, β, γ and δ exist in the course of the study. In the second place, there are four kinds of C genes, MC-1a, MC-2a and MC-3a, which are separated from type I, type II and type III. These antibodies were detected by immunohistochemical methods in the central nervous system. Type I C cells were isolated from the hippocampus and pyramidal cells. Type II cells were isolated from the hippocampus and granular cells. Type III cells were isolated from the hippocampus. The distribution of type I, type II and type III in hematopoietic tissue was observed. The results of this study were as follows: Type I delta, Type II alpha and beta, Type III gamma reverse, Type C reverse, Type C reverse. As a result of the analysis of each antibody, the regulatory site of each antibody was identified.