ポリオーマウイルスエンハンサーに結合する蛋白因子の精製と機能解析

多瘤病毒增强子结合蛋白因子的纯化和功能分析

基本信息

批准号：
63015035
负责人：
重定勝哉
金额：
$ 2.82万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

Ha-ras発癌遺伝子でトランスフォームしたマウスNIH3T3細胞に特異的に出現するエンハンサー結合蛋白因子,PEBP3,をDNA親和性クロマトグラフィーおよび高速液体クロマトグラフィーの組合わせによって高度に精製することが出来た。分子的解析の結果,同因子は次のような特徴的性質を持つことが明らかとなった。(1)2種類のサブユニットαとβ,それぞれの分子量20-25Kおよび30-35K,からなるヘテロダイマーである。(2)αとβは共にDNA結合活性を持ちしかもその認識配列は全く同等である。従ってPEBP3は全体として2価の結合能を持ち,それによってDNAにループ構造を形成させる働きがあるものと考えられる。(3)ポリオーマウイルスエンハンサー上の中心的機能領域であるAおよびBエレメントの双方にほぼ同じ強さで特異的に結合する。前項の性質を考え合わせれば,本因子はポリオーマウイルスのDNA複製および遺伝子発現の制御に対して,従来予想されていた以上に重要な役割を果たすものと目される。(4)PEBP3の活性レベルおよび分子的性状は細胞分子化あるいは種々の発癌遺伝子の影響下に大きく変動する。これらの知見より,PEBP3は従来未知の新しい様式の制御機能を荷なう興味深い因子であることが明らかとなって来た。今後さらに本因子の生物学的役割を具体的に追究して行くために,精製標品をもちいてアミノ酸配列決定を進め,それを手がかりとして遺伝子クローニングを目指す予定である。

PEBP3是一种增强子结合蛋白因子，该因子特异性出现在用HA-RAS致癌基因转化的小鼠NIH3T3细胞中，可以通过结合DNA亲和色谱和高性能液相色谱法来高度纯化。分子分析表明，同一因子具有以下特征特性：（1）它是由两种类型的亚基α和β组成的异二聚体，分别为20-25k和30-35k。（2）α和β都具有DNA结合活性，其识别序列是完全等效的。因此，据信PEBP3具有总结合能力，因此在DNA中形成环结构的功能。（3）它特异性结合了A和B元素，即具有相同强度的多瘤病毒增强子上的中央功能区域。考虑到上一节的性质，认为该因素在多瘤病毒中DNA复制和基因表达的调节中起着比以前预期的更重要的作用。（4）PEBP3的活性水平和分子特性因细胞分子或各种致癌基因的影响而差异很大。这些发现表明，pebp3是一个有趣的因素，它具有未知和未知的新型类型的控制功能。为了进一步探索该因素在未来的生物学作用，我们计划使用纯化的制剂来进行氨基酸测序，并将其用作克隆基因的线索。