Haーrasによって誘導されるエンハンサー結合因子の遺伝子クローニングと機能解析

Haras诱导的增强子结合因子基因克隆及功能分析

• 批准号: 01015041
• 负责人: 重定 勝哉
• 金额: $ 3.65万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01015041/
• 关键词: 発癌遺伝子; Haーras; エンハンサー; DNA結合因子; ヘテロダイマー; ポリオーマウイルス; cーmyc; トランスフォーム細胞

我々は、先にポリオーマウイルスエンハンサー中のAエレメントに結合する細胞性因子PEBP2を同定し、その分子的性状がHaーrasによるトランスフォーメーションに際して劇的に変化することを見いだした。そこで本研究ではPEBP2の機能と役割をさらに追究するために本因子の分子的特性解析とcDNAクローニングを次の如く進めた。まずトランスフォーム細胞をヌードマウスに移植して作らせた癌組織を出発材料とし、DNAアフィニティークロマトグラフィーを主体とする方法によりPEBP2の精製を行った。数百匹分の材料を処理することにより、総計数十マイクログラムの純化標品を得ることが出来た。これを用いてアミノ酸配列の決定を行い2ー3の部分配列を得た。この情報を基に現在cDNAクローニングを遂行中である。他方、分子的解析の結果、PEBP3は(i)2種類のサブユニットalphaとbeta(分子量30ー35Kおよび20ー25K)からなるヘテロダイマーである、(ii)alphaとbetaは共にDNA結合活性を持ち、しかもその認識配列は全く同等である。(iii)PEBP2は全体として2価のDNA結合能を持ち、DNAにループ構造を形成させる働きがあるなど種々の特徴的性質を持つことが判った。これらの知見に加えて,PEBP3はポリオーマウイルスエンハンサー上の中心的機能領域であるAおよびBエレメントの双方にほぼ同じ強さで特異的に結合することが見いだされ、同因子がポリオーマウイルスの転写・複製の制御にとって従来予想された以上に重要な役割を果している可能性が示唆された。さらに細胞遺伝子上での役割に関する有力な手がかりとして、発癌遺伝子cーmycの上流域に存在するDNA複製開始信号配列にPEBP3が結合することが見いだされた。

The first step is to combine the cellular factor PEBP2 with the molecular traits of the human body. This study investigated the function of PEBP2 and its molecular characterization. The method for purification of PEBP2 in the presence of a host cell is described in detail below. Hundreds of fractions of materials were processed and purified to produce dozens of samples. 2 - 3 of the acid allocation decisions The information base is now cDNA. The results of molecular analysis of PEBP3 show that (i) two kinds of alpha beta (molecular weight 30 - 35 K) and (ii) alpha beta have the same DNA binding activity. (iii) DNA binding energy of PEBP2 is determined by DNA binding structure. PEBP 3 has the ability to combine the functions of both A and B in the center of the server, and to combine the functions of both A and B in the center of the server. DNA replication initiation signal alignment and binding of PEBP3 in the upstream region of the cell genome

项目成果

T.Kawamura,K.Shigesada,F.Kimizuka and K.Izui: "Phosphoenolpyruvate Carboxylase Prevalent in Maize Roots:Isolation of a cDNA Clone and Its Use for Analysis of the Gene and Gene Expression" J.Biochem.(Japan). 107. 165-168 (1990)

T.Kawamura、K.Shigesada、F.Kimizuka 和 K.Izui：“玉米根中普遍存在的磷酸烯醇丙酮酸羧化酶：cDNA 克隆的分离及其用于基因和基因表达分析的用途”J.Biochem.（日本）。

K.Furukawa,Y.Yamaguchi,E.Ogawa,K.Shigesada,M.Satake and Y.Ito: "A Ubiquitous Repressor Interacting with an F9-specific Silencer and Its Functonal Suppression by Differentiated-cell-specific Positive Factors" Cell Growth and Differentiation. 1. (1990)

K.Furukawa、Y.Yamaguchi、E.Okawa、K.Shigesada、M.Satake 和 Y.Ito：“与 F9 特异性沉默子相互作用的普遍存在的阻遏蛋白及其通过分化细胞特异性正因子的功能抑制”细胞生长

Y.Kamachi,E.Ogawa,M.Asano,M.Satake,Y.Ito and K.Shigesada: "Purification of a Mouse Nuclear Factor that Binds to Both the A and B elements the Polyomavirus Enhancer" J.Virol.,subitted.

Y.Kamachi、E.Okawa、M.Asano、M.Satake、Y.Ito 和 K.Shigesada：“与多瘤病毒增强剂 A 和 B 元件结合的小鼠核因子的纯化”J.Virol.，提交