幼弱B細胞の分化を駆動させるcDNAクロ-ンの単離

分离驱动未成熟 B 细胞分化的 cDNA 克隆

• 批准号: 03670249
• 负责人: 杉山 治夫
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03670249/
• 关键词: 幼若B細胞; cDNAサブトラクション; Abelsonマウス白血病ウイルス

Abelsonマウス白血病ウイルスでトランスフォ-ムしているため、許容温度(35℃)で培養すると増殖すのみであるが、非許容温度(39℃)で培養すると、分化が誘発される未熱B細胞株SPL2ー1ー2を用い、幼弱B細胞の分化を駆動させるcDNAクロ-ンの単離を試みた。許容温度で維持しているSPL2ー1ー2の培養温度を、非許容温度に上げてから7日目の細胞(分化が強く誘発されている時期)から、ployA^+RNAを抽出し、f1 originをもったvectorを用いてcDNAライブラリ-からf1 oriを用いて、antiーsense ssDNAを作製し、一方、Abelsonウイルスでトランスフォ-ムした線維芽細胞及びプラズマ細胞からmRNAを抽定し、biotin化した。このbiotin化mRNAと先のantiーsense ssDNAとの間で、hybridizationを行ない、avidinカラムを用いて、hybridizeしなかったantiーsense ssDNAを集めdsDNAに換え、SPL2ー1ー2にのみ発現し、線維芽細胞やプラズマ細胞では発現しないcDNAクロ-ンを単離した。そのうちの1つのcDNAクロ-ンであるSPL212ー1は、リンパ球のみに特異的に発現することが、Northern法を用いた解析で判明した。このcDNAクロ-ンの塩基配列から、216コのアミノ酸からなり、ロイシンが個、連続して存在する、今までに報告のない新しいタンパクであることがわかった。現在、生物学的機能を解析中である。

Abelson leukaemia cell line SPL2 - 1 - 2, immature B cell SPL2 - 1 - 2, immature B cell SPL2 - 1 - 1 - 2, immature B cell SPL2 The culture temperature of SPL2 ~ 1 ~ 2 was maintained at the temperature of 7 days, and the cells (differentiation period) were cultured at the temperature of 7 days. The expression of ployA^+RNA was extracted from the cells. The expression of f1 origin was extracted from the cells. The expression of f1 origin was extracted from the cells. The expression of anti sense ssDNA was extracted from the cells. The expression of mRNA in the cells was determined by biotin. The biotin mRNA and anti-sense ssDNA are isolated from the genome, hybridization, avidin, hybridization, anti-sense ssDNA, dsDNA, SPL2, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 The Northern method was used to analyze the expression of SPL212. This cDNA is a new cDNA fragment that has been reported in the past. Now, Biological function analysis in.

项目成果

S.Tsukada: "Continuing Vγ_2 to Jγ_2 rearrangements of murine T cell receptor gamma genes in a Bーcommitted immature cell line" Molecular Immunology.

S. Tsukada：“在 B 定型未成熟细胞系中小鼠 T 细胞受体 γ 基因的持续 Vγ_2 到 Jγ_2 重排”分子免疫学。

Y.Shimizu: "Regulation of Thyー1 gene expression by the methlation of the 5' region of Thyー1 gene and intracellular regulatory factors in immature B cells." Immunological Investigations.

Y.Shimizu：“未成熟 B 细胞中 Thy-1 基因 5 区域甲基化和细胞内调节因子对 Thy-1 基因表达的调节。”

M.Nakagawa: "cDNA cloning of the murine 30ーkDa protein homologous to the 32ーkDa subunit of human replicatoin protein A" Nucleic Acid Research. 19. 4292 (1991)

M. Nakakawa：“与人复制蛋白 A 的 32 kDa 亚基同源的鼠 30 kDa 蛋白的 cDNA 克隆”《核酸研究》19. 4292 (1991)。

Y.Minami: "Monoclonal antiーV_H141 antibodies that specifically recognize the heavy chain variable region of,and closely related to,MOPC141 myeloma protein whose V_H gene belongs V_HQ52 family" Immunology. 72. 464-470 (1991)

Y.Minami：“特异性识别 MOPC141 骨髓瘤蛋白重链可变区且与其密切相关的单克隆抗 V_H141 抗体，该蛋白的 V_H 基因属于 V_HQ52 家族”《免疫学》72. 464-470 (1991)。

S.Tsukada: "Nucleotide deletion of T cell receptor Vγ_2 and Jγ_2 coding sequences at Vγ_2ーJγ_2 junctions in immature B cell line" Molecular Immunolgy.

S. Tsukada：“未成熟 B 细胞系中 Vγ_2－Jγ_2 连接处 T 细胞受体 Vγ_2 和 Jγ_2 编码序列的核苷酸缺失”分子免疫学。