ヒト血液幹細胞の純化とその自己複製に関する研究

点击翻译按钮获取中文摘要

1.ヒト血液幹細胞の純化:血液幹細胞は、多分化能をもつと同時に、造血系を維持する自己複製能を有すると考えられる.このような幹細胞は、全有核細胞10^4〜10^5に1個の頻度で存在する.幹細胞の機能を解析するためには、この細胞を純化する必要がある.我々は、ヒト骨髄細胞からCD34抗体を用いてFACSによりCD34抗原陽性細胞を純化し、そのコロニ-形成能を検討したところ、約3個に1個が前駆細胞であることを明らかにした.このうち、CD33抗原陽性細胞は、ILー3の他にGーCSFにも反応し、顆粒球系への分化が決定されていると考えられる.これに対し、CD33陰性細胞は、ILー3にのみ反応し、多方向への分化が可能であった.これらの結果から、CD34抗原は全骨髄細胞の約1%に表現され血液細胞に特異的な抗原と考えられた.2.ヒト血液幹細胞の自己複製能:次に、我々は、ヒト骨髄細胞を低温で培養することにより間質(ストロマ)細胞層を用意し、幹細胞との共培養を行なった.CD34陽性CD33陽性細胞は、ストロマ細胞層上では、2ー3個で消失したが、CD34陽性CD33陰性細胞は5ー6週にわたってコロニ-形成細胞を生みつづけた.この結果は後者の細胞が、ストロマ細胞上である程度の自己複製を示したものと考えられる.3.CD34抗原の遺伝子発現:我々は、このCD34抗原の機能を知るために、マウス造血系でCD34抗原の発現を検討し以下のことを明らかにした.(1)CD34抗原は、脳,睾丸で発現率が高く、骨髄,脾ではほとんど検出されなかった.(2)造血を支持するストロマ細胞株PAー6で、CD34抗原はILー1刺激などによって誘導される.(3)胎生12ー16日の肝で発現され、生体肝では検出されなかった.(4)ILー1刺激したPAー6のcDNA Libraryよりmouse CD34遺伝子をつりあげた.今後、この遺伝子の発現機構を検討することによりCD34の機能を明らかにしていきたい.