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癌における糖鎖合成酵素の遺伝子発現と臨床応用

糖链合酶基因在肿瘤中的表达及临床应用

基本信息

批准号：
03151002
负责人：
牧田章
金额：
$ 10.11万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.アスパラギン糖鎖のbisectを形成するGlcNAc転移酵素III(GnT III)をラット腎から精製した。この酵素の部分アミノ酸配列に基づきcDNAをクロ-ニングし、酵素蛋白(62KDa)の一次構造を推定した。その結果、N端近傍に膜貫通領域があり、構造既知の糖転移酵素と全体的構造は似ているが、一次構造上のhomologyはなかった。このcDNAをCOSー1やHeLa細胞にトランスフェクトして活性の発現を確かめた(論文投稿中)。GnT IIIは肝癌や胎児肝では発現していたが、成人肝ではしていなかった。2.癌患者体液に出現することが知られているβ1ー4Gal転移酵素(GT)の変異型(GTーI)の本態を明らかにした。即ち、先ずGTーIに特異的なモノクロン抗体を作製した。GTのcDNAの様々な欠損変異株をE.coliで発現し、GTーI抗体で検索した。その結果、GTーIはN端側の膜貫通領域を欠失した酵素であること、GTーI抗体は欠失酵素のN端側をエピト-プとすることが分かった。これによって、患者から精製したGTーIの特異な性質との対応が明らかになった。3.ヒト腎細胞癌で亢進する糖脂質硫酸化酵素は、細胞レベルで蛋白キナ-ゼC(PKC)の阻害剤やTPAによって著明な活性低下が起きた。TPAの作用はPKCをdownregulateする結果とみられ、本酵素の発現はPKCによって調節されることが分かった。他方、本酵素はEGFによって上昇するが、PKC阻害剤やTPAで前処理すると上昇はみられず、EGFによる誘導効果もPKCを介することを見出した。4.ラット肝癌や悪性変換細胞では共通して2→6シアル酸転移酵素が亢進する。癌では本酵素のmRNAはサイズ、量とも正常と大差はないが、本酵素蛋白は自己シアル酸化と部分ペプチドの解離を受けた活性型が癌で増加しており、翻訳後修飾が癌で本酵素の活性化をもたらす。

1. GlcNAc shift enzyme III(GnT III) is used to refine the enzyme. The primary structure of the enzyme protein (62KDa) was estimated. As a result, the N-terminal near-membrane penetration domain has been established, and the structure of the sugar transfer enzyme is similar to that of the primary structure. The expression of this cDNA in COS-1 and HeLa cells was confirmed (paper submission). GnT III liver cancer is a rare disease in children and adults. 2. The presence of β1 - 4Gal shift enzyme (GT) in body fluids of cancer patients has been identified. That is to say, the first GT I specific antibody is produced. GT cDNA was detected in E.coli and GT I antibody was detected. GT-I antibody N-terminal enzyme deficiency The special properties of GT are different from those of other patients. 3. Renal cell carcinoma is characterized by hyperactivity of glycolipid sulfatase and low activity of protein kinase C(PKC) and TPA. The effect of TPA on PKC down-regulation results in the production of PKC down-regulation. Other enzymes such as EGF, PKC, and TPA are also present. 4. Liver cancer cells are commonly activated by 2 - 6-amino acid transferase. In cancer, the mRNA of this enzyme is not expressed, the amount is normal or greatly different, the active form of this enzyme protein is increased in cancer due to its own acidification and partial protein dissociation, and post-inversion modifications contribute to the activation of this enzyme in cancer.