相同組換え遺伝子導入による発癌機構の研究

同源重组基因导入致癌机制研究

• 批准号: 03151018
• 负责人: 井川 洋二
• 金额: $ 11.84万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 1993
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03151018/
• 关键词: 相同組換え法; トランスジェニックマウス; ES細胞; がん抑制遺伝子の検証; p53の両側欠損; Hox3.5遺伝子; NFー1遺伝子; WTー1遺伝子

劣性表現を持つ癌抑制遺伝子の機能の検証は細胞が持つ一対の相同染色体の両側において当該遺伝子を欠損させなければならないが、それを可能にしたのが、マウス培養胚幹細胞(ES細胞)における相同組換えである。これにより正常遺伝子を欠損導入遺伝子と取替えることができる。そして、この相同組換え胚細胞由来のマウスの交配により両側の当該遺伝子を欠損させたマウスを得、劣性表現を示す当該遺伝子の機能を探る方法の効率化を検討する。そして、ES細胞における相同組換えを利用して個々に特徴ある発癌に関連する遺伝子、特にがん抑制遺伝子の生物個体における機能を解析することを目的としたものである。まず、キメラ形成能の高いES細胞系の樹立では、井川は、相沢らの協力で、正常3日胚(これまでは4日胚を用いた)からの樹立で、これに成功した。また、城石はMHC領域に高頻度組換えを起こすマウス系B10ーA(R209)のES細胞株ESR209.1を樹立しキメラ形成能を確認した。また、中辻はC57BL/6よりES細胞系を樹立し、その生殖系列キメラ形成能を確認した。また、卵原細胞を体外で培養し、雌マウスに移入し、操作された生殖細胞由来の子孫を得た。ES細胞系における相同組換えの高率化では、井川が、相沢らの協力で、ジフテリア毒素Aフラグメント遺伝子をネガティブ選択に用いることで成功し、実際に、ES細胞系でp53など3つの遺伝子の欠損導入を果たした。木村は、CーHaーrasに偽遺伝子がないことを確かめ、相同組換え用の同遺伝子を含むDNA断片をクロ-ン化した。高橋は、マウスHox3.5遺伝子を組換え用に構築した。若杉は、山村と共同で、相同組換えで欠損させるマウスNFー1遺伝子を単離した。また、野田(哲)は、マウスにおいてWTー1対応遺伝子を単離し、ES細胞系の同遺伝子に相同組換えで欠損を導入した。

Recessive performance を hold つ cancer inhibiting heritage 伝 son の function の 検 card が は cells with the つ の seaborne same chromosome の struck side に お い て when the legacy 伝 を son owe loss さ せ な け れ ば な ら な い が, そ れ を may に し た の が, マ ウ ス cultivate embryonic stem cells (ES cells) に お け る in same group え で あ る. <s:1> れによ normal inheritance 伝 を deficient import inheritance 伝 と replace える とがで とがで る る そ し て, こ の in same group え germ cell origin の マ ウ ス の mating に よ り の struck side when the posthumous son 伝 を owe loss さ せ た マ ウ ス を, recessive performance を す indicated when the legacy 伝 son の function を agent る method の sharper rate change を beg す 検 る. そ し て, ES cells に お け る in same group え を using し て a 々 に, 徴 あ る 発 carcinoma に masato even す る heritage 伝 son, に が ん inhibit heritage 伝 son の biological individual に お け る function analytical す を る こ と を purpose と し た も の で あ る. ま ず, キ メ ラ can form high の い ES cell lines の set で は, igawa は, phase ohsawa ら の together で, normal 3 embryos (こ れ ま で は 4 embryo を with い た) か ら の で, こ れ に successful し た. ま た, city stone は MHC domain に high frequency group in え を up こ す マ ウ ス department B10 ー A (R209) の ES cell lines ESR209.1 を set し キ メ ラ can form を confirm し た. Youdaoplaceholder0, Nakatsuji また C57BL/6よ <s:1> ES cell line を establishment を, そ <s:1> reproductive series キメラ formation can を confirm た た. Youdaoplaceholder0, oogonial cells を are cultured in vitro at で, female また ウスに are transplanted into また, and された germ cells are manipulated to produce を offspring た. ES cell lines に お け る in same group え の high rate で は, igawa が, phase ohsawa ら の together で, ジ フ テ リ ア toxin A フ ラ グ メ ン ト posthumous son 伝 を ネ ガ テ ィ ブ sentaku に with い る こ と で し success, the event be に, ES cell lines で p53 な ど 3 つ の heritage 伝 の son owe loss import を fruit た し た. は kimura, C ー Ha ー ras に pseudo heritage 伝 son が な い こ と を か indeed め, the same group in え son use the same but 伝 の を containing む DNA fragment を ク ロ ン to し た. Takahashi ウス, ウスHox3.5, the 伝 sub-を group was replaced with え and に was used to construct <s:1> た. Wakasugi た and yamamura と jointly で, the same group exchange えで is in short supply させる ウス ウスNF を単 1 is left 伝 を単 away た. は ま た, noda (philosophy), マ ウ ス に お い て WT ー 1 応 seaborne heritage 伝 son を 単 し, ES cell lines の with heritage 伝 に son in the same group え で owe loss を import し た.

项目成果

Ikawa,Y.: "Search for genes cooperating with SFFV-gp55 transgene in Friend erythroleukemia development.Genetic intervention in diseases with unknown etiology." Molecular Approaches to the Study and Treatment of Human Diseases.T.O.Yoshida and J.M.Wilson,ed

Ikawa,Y.：“在 Friend 红白血病发展中寻找与 SFFV-gp55 转基因合作的基因。对病因不明的疾病进行基因干预。”

Hashimoto,K.: "Mouse offspring derived from fetal ovaries or reaggregates which were cultured and transplanted into adult females." Develop.Growth and Differ.(1992)

Hashimoto,K.：“来自胎儿卵巢的小鼠后代或经过培养并移植到成年雌性体内的重组体。”

Yamamura,K.: "Manipulating the mouse genome:New approaches for the dissection of mouse development." Develop.Growth and Differ.32(2). 93-100 (1991)

Yamamura,K.：“操纵小鼠基因组：解剖小鼠发育的新方法。”

Nakatsuji,N.: "Radial columnar patches in the chimeric cerebral cortex visualized by use of mouse embryonic stem cells expressing βーgalactosidase." Develop.Growth and Differ.33. 571-578 (1991)

Nakatsuji, N.：“使用表达 β-半乳糖苷酶的小鼠胚胎干细胞可视化嵌合大脑皮层中的径向柱状斑块。” Develop.Growth and Differ.33 (1991)。

Yagi,T.: "A new method for negatively selecting random integrants using diphtheria toxin A fragment gene:Efficacious isolation of homologous recombinants at c-fyn locus of mouse embryonic stem cells.Genetic intervention in diseases with unknown etiology."

Yagi,T.：“一种使用白喉毒素 A 片段基因负选择随机整合体的新方法：在小鼠胚胎干细胞的 c-fyn 基因座上有效分离同源重组体。对病因不明的疾病进行遗传干预。”