权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

先天性アミノ酸尿症の原因としてのヒト塩基性アミノ酸トランスポーターの同定

鉴定人类碱性氨基酸转运蛋白是先天性氨基酸尿症的原因

基本信息

批准号：
05770829
负责人：
善本隆之
金额：
$ 0.58万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

Ecotropicマウス白血病ウイルスレセプター(ERR)としてクローニングされたタンパク質分子は、細胞内外のアルギニン、リジン等の塩基性アミノ酸の輸送を司るトランスポーターとしても機能する。今回は、まず私達がクローニングしたERRのヒトホモローグ(H13,アミノ酸配列の相同性は87.6%)が、マウス白血病ウイルスのレセプターとしては機能しないことを利用し、ヒトとマウスのキメラ分子、さらにSite-Directed Mutagenesisの手法を用いMutantを作製し、ウイルスレセプターとしての機能及びトランスポーター活性を調べた。その結果、ERR分子中の235番目のTyr残基がウイルス感染に重要なアミノ酸残基であり、またこれらのMutantationはトランスポーター活性にはほとんど影響を与えないことが明らかになった。次に、抗H13モノクローナル抗体を作るため、上述の領域を含む第3番目の細胞外領域とGlutathione S-TransferaseとのFusion Proteinを作製し、アルメニアハムスターに免疫し、その脾臓をAg8.653細胞と細胞融合させ、現在スクリーニング中である。抗体が得られれば、腎臓等の臓器における免疫組織学的検討を行う予定である。一方、二塩基性アミノ酸尿症患者からBiopsyにより採取し樹立した細胞株を東邦大学大森病院より頂き、DNA及びRNAを調製し、現在、Southern及びNorthern Blotを行っている。今後、この細胞のRNAよりこの患者のトランスポーターcDNAをRT-CRによりクローニングし、そのトランスポーター活性を測定する予定である。

Ecotropic leukemia virus (ERR) moleculeは, のアルギニン, リジン and other basic アミノ acid transport functions inside and outside the cell. This time, the same as the original H13 acid formula, the same as the original acid formula, 87.6%, is white. Blood disease ウイルスのレセプターとしてはfunctional しないことをutilizationし, ヒトとマウスのキメラmolecule, さらにSite-Directed Mutagenesis's techniques include Mutant production, Mutant function, and Active tuning. As a result, the 235th Tyr residue in the ERR molecule is important for infection.らのMutantation はトランスポーターActive にはほとんど Effect を and えないことが明らかになった. Second, anti-H13 モノクローナル antibody をるため, the above-mentioned field をcontains 3rd section of the extracellular field とGlutathione S-Transferase とのFusion Protein を production し, アルメニアハムスターにimmune し, その spleen 蓓をAg8.653 cells と cell fusion させ, and now スクリーニング中である. Antibodies, kidney tumors, etc. can be determined by immunohistology. On the one hand, the biopsy of patients with dibasic aciduria was used to establish the cell line and DNA and RNA at Toho University Omori Hospital and prepare it, and now it is Southern and Northern. Blotを行っている. From now on, the patient's RNA cells will be RT-C Rによりクローニングし,そのトランスポーターactivity measurement and predetermined determination.