PCR法を用いたブロイラーのカンピロバクター汚染源の検討

PCR法调查肉鸡弯曲杆菌污染源

• 批准号: 06760284
• 负责人: 中馬 猛久
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06760284/
• 关键词: カンピロバクター; ブロイラー; PCR

Campylobacter jejuni/coliはヒトの急性下痢症の原因の一つであり、本菌による食中毒の発生が多くみられていることから公衆衛生学上重要視されている。鶏からはC. jejuni/coliが高率に検出されており、鶏肉がヒトへの感染に関与していることが示唆されているが、ブロイラーの生産段階におけるC. jejuni/coli感染源や伝播様式はよくわかっていない。これは従来の培養によるC. jejuni/coli検出法の煩雑さや感度の限界に起因するものと考えられる。一方、近年、PCR法による遺伝子を用いた細菌の迅速検査法が注目されている。PCR法は検出感度が高く簡便で多検体処理が可能な方法とされているので、この方法がC. jejuniの検出に適用できるか否かについて基礎実験を行った。PCR法に用いるプライマーは、すでに報告されているC. jejuniの鞭毛物質Flagellin Aをコードする遺伝子の塩基配列を参考にしてデザインし、C. jejuni subsp. jejuni ATCC33560(標準菌株)より抽出したDNAを試料としてPCRを行ったところ、PCR産物は塩基配列から予想される長さ(458bp)と一致し、その検出限界は1.0X10^2CFU/mlであった。ブロイラーの糞便中に混入したC. jejuniのDNA抽出法を検討しPCRを実施すると、その検出限界は3.4X10^4CFU/mlであった。さらにサザンブロット法を適用すると、このPCR産物がC. jejuniに由来することが明らかになり、検出限界が3.4X10^2CFU/mlに上昇した。以上の結果をふまえて、実験室内で飼育した0日齢、7日齢、14日齢、21日齢のブロイラーのC. jejuni保菌率を調査した。PCR法では全日齢で陰性であったが、サザンブロット法ではそれぞれ20%、17%、83%、33%が陽性であった。この成績から従来の培養法では陰性とされてきた若齢の雛でもC. jejuniに汚染されている可能性が示された。今後は、PCR法の感度をさらに上昇させ、ブロイラーの本菌による汚染経路を詳細に検討していく必要があると考えられた。

Campylobacter jejuni/coli is an important public health cause of acute diarrhea.鶏からはC. The high rate of jejuni/coli infection is related to the production stage of the disease. Jejuni/coli infection source and propagation pattern C. Jejuni/coli detection method and sensitivity of the limit of the cause of the test In recent years, rapid detection of bacteria by PCR has attracted much attention. PCR method is highly sensitive, simple, and feasible for multi-modal processing. Jejuni's search is applicable. PCR method is used to report on C. Flagellin A, a flagellum substance of jejuni, is used as a reference for gene base alignment. jejuni subsp. jejuni ATCC33560(standard strain) was isolated from the DNA sample and PCR was performed. The PCR product was mapped to a length of 458bp. The detection limit was 1.0X10^2CFU/ml. C. is mixed in the feces. The detection limit of jejuni DNA extraction method is 3.4X10^4 CFU/ml. The PCR products of the PCR products were C. Jejuni is the highest concentration of 3.4X10^2CFU/ml. The above results show that the indoor rearing time is 0, 7, 14 and 21 days. Jejuni preservation rate was investigated. PCR method is negative for 20%, negative for 17%, positive for 33%. The results of this method are negative, negative, negative and negative. Jejuni, please check the possibility. In the future, the sensitivity of PCR method will be increased, and the contamination path will be discussed in detail.