心血管系への遺伝子デリバリーシステムの開発と遺伝子治療への応用

心血管系统基因传递系统的开发及其在基因治疗中的应用

• 批准号: 07407020
• 负责人: 矢崎 義雄
• 金额: $ 23.55万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07407020/
• 关键词: 遺伝子導入; 心血管系; トランスジェニックマウス; 組織特異性; 遺伝子プロモーター; ウイルスベクター; 循環器疾患; 遺伝子治療; ウィルスベクター

平成7・8年度の研究において、我々は、エンドセリン-1(ET-1)遺伝子プロモーター領域を用いた血管壁選択的遺伝子発現系を確立し、これを用いたトランスジェニックマウスを作成した。1.エンドセリン-1(ET-1),アドレノメデュリン(AM)過剰発現マスウ:ET-1過剰発現マウスの組織・血中ET-1濃度は野生型マウスの2〜4倍で、低体重と体毛の減少を認めたが、無麻酔無拘束下またはウレタン麻酔下での観血的動脈圧は野生型に比べ差はなく、生理的にみられる程度のET-1の産生増加は、慢性期では血圧レベルに影響しないと考えられた。AM過剰発現マウスのうち1系統は、大動脈AM濃度は野生型マウスの約10倍であった。2.血管系選択的コンディショナル遺伝子発現マウス:テトラサイクリン反応性オペレーター遺伝子配列(tetO)にレポーター遺伝子(LacZ)を結合したコンスラクト(A)、ET-1プロモーター領域9.2kbにテトラサイクンリプレッサー蛋白(tetR)とVP16C末転写活性化領域の融合蛋白を結合したコンストラクト(B)をそれぞれ作成し、A・Bそれぞれより各々複数のラインを得た。tetOによるLacZ発現をin vitroで確認した後、現在それぞれの系の交配を進め、両方のコンストラクトが組み込まれたマウスの樹立行っている。以上から、この血管壁遺伝子発現系による遺伝子発現は生理的産生量に匹敵もしくは凌駕するレベルを示し、血管系における遺伝子機能解析への高い応用性が示された。さらに、コンディショナル遺伝子発現系の応用により、血管系でのテトラサイクリンによるON-OFFの調節が期待される。現在、ウイルス系ベクターを用いた遺伝子導入へ向けての準備を進めている。3.これとともに、我々は平滑筋・心筋ミオシン重鎖遺伝子をクローニングし、それらのプロモーター領域のin vitroにおける組織特異的転写活性調節機構を明らかにしてきた。これらをレポーター遺伝子に連結した遺伝子コンストラクトを作成し、平滑筋や心筋に特異的な遺伝子発現をするトランスジェニックマウスの作成を試みている。

Pp.47-53 July 8 annual の research に お い て, I 々 は, エ ン ド セ リ ン - 1 (ET 1) posthumous son 伝 プ ロ モ ー タ を ー field with い traces of blood vessels to た sentaku 伝 を 発 now department established し, こ れ を with い た ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス を made し た. 1. エ ン ド セ リ ン - 1 (ET - 1), ア ド レ ノ メ デ ュ リ ン (AM) before turning 発 now マ ス ウ : ET - 1 before turning 発 now マ ウ ス の tissue, blood concentration of ET - 1 は wild-type マ ウ ス で の 2 ~ 4 times, low weight と hair の reduce を recognize め た が, hemp 酔 inhibited under ま た は ウ レ タ ン hemp 酔 under で の 観 artery blood 圧 は に wild type Worse than べ は な く, physiological に み ら れ る degree の produce raised plus は の ET - 1 and chronic で は blood 圧 レ ベ ル に influence し な い と exam え ら れ た. The occurrence of AM in the <s:1> ウス うち うち1 system うち and the AM concentration in the large arteries うち wild-type ウス ウス is about 10 times であった. 2. Blood vessels are sentaku コ ン デ ィ シ ョ ナ ル posthumous son 伝 発 now マ ウ ス : テ ト ラ サ イ ク リ ン anti 応 sex オ ペ レ ー タ ー heritage 伝 with sequence (tetO) に レ ポ ー タ ー heritage 伝 child (LacZ) を し た コ ン ス ラ ク ト, ET - 1 (A) プ ロ モ ー タ ー area 9.2 KB に テ ト ラ サ イ ク ン リ プ レ ッ サ ー protein (tet R) と VP16C の planning write activeness field at the end of the fusion protein を combining し た コ ン ス ト ラ ク ト (B) を そ れ ぞ れ make し, a. B そ れ ぞ れ よ り each 々 plural の ラ イ ン を た. TetO に よ る LacZ 発 を now in vitro で confirm し, now after た そ れ ぞ れ の is の mating を into め, struck の コ ン ス ト ラ ク ト が group み 込 ま れ た マ ウ ス の set line っ て い る. Above か ら, こ の traces of blood vessel walls 伝 発 now son is に よ る posthumous son 伝 発 now は discharge of physiological に match も し く は above す る レ ベ ル を し, vascular system に お け る heritage 伝 sub function analytical へ の high い 応 use sex が shown さ れ た. さ ら に, コ ン デ ィ シ ョ ナ ル posthumous son 伝 発 now is の 応 with に よ り, vascular で の テ ト ラ サ イ ク リ ン に よ る ON - OFF の adjust が expect さ れ る. Now, ウ イ ル ス department ベ ク タ ー を with い た posthumous son 伝 import へ to け て の prepare を into め て い る. 3. こ れ と と も に, I 々 は smooth muscle, heart muscle ミ オ シ ン traces of heavy lock 伝 son を ク ロ ー ニ ン グ し, そ れ ら の プ ロ モ ー タ の ー field in vitro に お け る tissue specific planning write activity regulating mechanism を Ming ら か に し て き た. こ れ ら を レ ポ ー タ ー posthumous son 伝 に link し た posthumous son 伝 コ ン ス ト ラ ク ト を made し, smooth muscle や な of heart muscle に specific 伝 son 発 now を す る ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス の done try を み て い る.

项目成果

桑木共之他: "Impaired ventilatory responses to hypoxia and hypercapnia in mutant mice deficient in endothelin-1." Am. J. Physiol.(in press).

Tomoyuki Kuwagi 等人：“内皮素 1 缺陷的突变小鼠对缺氧和高碳酸血症的通气反应受损。”J. Physiol。

前村浩二他: "Renal endothelin and hypertension-reply." Nature. 372. 50 (1994)

Koji Maemura 等人：“肾内皮素和高血压 - 回复”372. 50 (1994)。

栗原 由起子: "Aortic arch malformations and ventricular septal defect in mice deficient in endothelin-1" J.Clin.Invest.96. 293-300 (1995)

Yukiko Kurihara：“缺乏内皮素-1 的小鼠的主动脉弓畸形和室间隔缺损”J.Clin.Invest.96 (1995)。

栗原 裕基: "Targeting gene expression to the vascular wall in transgenic mice using the murine preproendothelin-1 promoter." J.Clin.Invest.95. 1335-1344 (1995)

Yuki Kurihara：“使用鼠前内皮素原 1 启动子将基因表达靶向转基因小鼠的血管壁。”J.Clin.Invest.95 (1995)。

南野 徹: "Endothelin converting enzyme(ECE-1)expression in the rat vascular injury model and human coronary atherosclerosis." Circulation. 95. 221-230 (1997)

Toru Minamino：“大鼠血管损伤模型和人冠状动脉粥样硬化中的内皮素转换酶 (ECE-1) 表达。” 95. 221-230 (1997)。