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PCR法及び外来遺伝子発現系による薬物トランスポータ群の構造・機能解析

利用PCR方法和外源基因表达系统分析药物转运蛋白的结构和功能

基本信息

批准号：
07772163
负责人：
齋藤秀之
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

薬物の腸管吸収及び腎排泄はベクトル的な経細胞輸送過程であり、上皮細胞膜を構成する刷子縁膜(管腔側)と側底膜(血管側)に局在する輸送系(トランスポータ)の介在によって制御されている。本研究では、PCR法及び外来遺伝子発現系を応用し、薬物トランスポータ群のクローニングとそれに基づく構造・機能解析を目的とした。1)ペプチドトランスポータのcDNAクローニングと構造・機能及び組織分布家兎オリゴペプチドトランスポータPEPT1のアミノ酸配列を参考にPCR法を応用してラットに発現している2種類のペプチドトランスポータのcDNAを単離した。クローン化したラットPEPT1及びPEPT2は、それぞれ710個及び729個のアミノ酸からなる12回膜貫通型タンパク質であった。ノーザンブロット分析並びにPCRによって両トランスポータの臓器分布を調べた結果、PEPT1の発現は小腸に最も多く、腎皮質にも存在すること、一方PEPT2は腎にほぼ特異的に発現していることが示唆された。抗PEPT1抗体を用いてウェスタンブロッティングを行ったところ、PEPT1は十二指腸、空腸及び回腸に強く発現していたが、結腸や直腸では検出されなかった。さらに、免疫染色によってラット小腸並びに近位尿細管刷子縁膜にPEPT1の局在していることが確認された。外来遺伝子発現系を用いた機能解析によって、ラットPEPT1及びPEPT2はβ-ラクタム抗生物質等のペプチド類似薬物を認識し輸送することが明らかとなった。2)腎有機アニオントランスポータのcDNAクローニング及び構造機能解析肝有機アニオントランスポータ(oatp)のアミノ酸配列を基に、腎尿細管特異的に発現している新規有機アニオントランスポータ(OAT-K1)のcDNAをクローニングした。ラットOAT-K1は、一部の腎排泄型アニオン性薬物の尿細管側底膜輸送を媒介していることが示唆された。

The membrane of the epithelial cell is divided into the brush membrane (lumen) and the bottom membrane (blood vessel). In this way, the cell membrane of the epithelial cell is divided into a brush membrane (lumen) and a bottom membrane (blood vessel). In this part, the system is used in the system. In this study, the methods of PCR and foreign products are used to analyze the target data. 1) do you need to know that the machine and the organization can be used to improve the quality of cDNA? This is the first time to change the number of PEPT1 and PEPT2, 710 and 729 of them, and to use 12 films to get back to the general purpose of the market. After analyzing and analyzing the results of the PCR distribution test, the results of the PEPT1 test show that the number of symptoms is the most frequent, that there is an error in the skin, and that there is an indication of the presence of a special device in the PEPT2. The anti-PEPT1 antibody was used to detect the infection rate in the serum of the patients with 12 fingers, 12 fingers and 12 fingers. Make sure that the proximal urethral tube brush and the membrane of the proximal urethral tube brush are used to make sure that the PEPT1 is correct. Foreign customers can use the machine to analyze information, such as PEPT1, PEPT2, β-chain, anti-biological agents, and so on, which are similar to those sent to you. 2) the equipment can be used to analyze the data of the cDNA equipment and the machine that can be used to analyze the acid distribution of the liver-owned equipment (oatp), and the detection of the new regulation of the urine pipe. The cDNA machine (OAT-K1) has the ability to realize the new regulation of the system. "OAT-K1", "excretion", "sex", "urine tube", "bottom membrane", "carrier", "carrier", "instigation".