新しいスクリーニング法を用いたタンパク質リン酸化・脱リン酸化の調節機構の解明

使用新的筛选方法阐明蛋白质磷酸化/去磷酸化的调节机制

• 批准号: 07857012
• 负责人: 小林 孝安
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07857012/
• 关键词: プロティンホスファターゼ2C; タンパク質の相互作用

哺乳類のタンパク質ホスファターゼ2C型(以下PP2Cと略す)を大腸菌で過剰発現させると、おそらく大腸菌の2-コンポーネントシステムで重要なヒスチジン残基が脱リン酸化されるために生育が著しく阻害される。本研究の目的は、この性質を利用してtwo-hybridsystemに代わる相互作用タンパク質の新しいスクリーニング法を開発することである。しかしながら、実際に試みてみた結果、本法に関して次のような問題点があることが分った。(1)本法は過剰発現させたPP2Cによる阻害作用を抑圧するような第二の遺伝子を導入することによってPP2Cを生理的に阻害しているタンパク質を見いだそうとするものであった。しかしながらPP2Cを大腸菌で発現された場合、大部分のtransformantの生育は阻害されるもののある頻度で生育が阻害されずコロニーを形成するようなものが出てきてしまった。従って本法が円滑に施行されるためには完全にコロニー形成が抑制されるような宿主の選択が必要と考えられる。(2)第二の問題点は、宿主として組み換え不能なrecA株を用いているにも関わらず、第二のプラスミドを導入したのちに、あらかじめ導入しておいた発現ベクターとの間で組み換えを起こしてしまう点にある。その結果PP2Cの発現量が低下してコロニーを形成し、偽のコロニーを形成してしまうことが分かった。この場合も第一の問題点と同様、宿主の育成とともに適切なプラスミドの設計が不可欠である。以上の問題点を克服すべくさらに検討を進めている。

Mammals have the same type of DNA as their 2-terminal genes, and the same type of DNA as their 2-terminal genes, which are important for the development of E. coli. The purpose of this study is to develop a new method for the interaction of two hybrid systems. This law is related to the problems of the time and time. (1)This method can be used to inhibit the development of PP2C and the introduction of PP2C. In most cases, PP2C is present, and most of the transformants are resistant to fertility. The method is implemented in a complete manner, and the host selection is necessary. (2)The second problem point is that the host and the group cannot be replaced by the host. The second problem point is that the host and the group cannot be replaced by the host. The second problem point is that the host and the group cannot be replaced. As a result, the amount of PP2C is low, and the amount of PP 2C is low. In this case, the first problem is the same, the host is bred, and the design is not incomplete. The above problems should be overcome.

项目成果

N. Yokoyama 他: "PP2C phosphatase activity is coupled to cAMP- mediated pathway in ratparotid acinar cells." Biochem. Mol. Biol. Internatl.36. 845-853 (1995)

N. Yokoyama 等人：“PP2C 磷酸酶活性与大鼠腮腺腺泡细胞中的 cAMP 介导的途径相关。”Biochem. 845-853。

M. Nishikawa 他: "Up-regulation of protein serine/threonine phosphatase type 2C during 1α, 25-dihydroxyvitamin D3-induced monocytic differentiation of leukemic HL-60 cells." FEBS Lett.375. 299-303 (1995)

M. Nishikawa 等人：“1α, 25-二羟基维生素 D3 诱导的白血病 HL-60 细胞单核细胞分化过程中 2C 型蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶的上调。FEBS Lett.375 (1995)。

M. Ohnishi.他: "Localization of the mouse protein serine/threonine phosphatase 2Cβ gene to chromosome 17E4-5." Genomics. (印刷中).

M. Ohnishi 等人：“小鼠蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶 2Cβ 基因定位于染色体 17E4-5”。