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慢性骨髄性白血病の原因因子Bcr-Ablの標的蛋白質Dokの機能解析

慢性粒细胞白血病致病因子Bcr-Abl靶蛋白Dok的功能分析

基本信息

批准号：
10152212
负责人：
山梨裕司
金额：
$ 3.2万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

慢性骨髄性白血病の癌細胞中で極めて強くチロシンリン酸化されている蛋白質、p62は多種多様なチロシンキナーゼの共通基質でもある。代表者とバルチモアはp62をPH、PTB領域を持つドッキング蛋白質Dokとして同定し,既にそのノックアウトマウスも作成している。本年度は、Dokの機能解析通じて以下の成果を得た。1) Srcキナーゼのトランスフォーメーション活性はDokの過剰発現により約四分の一に抑制された。PTB領域に導入した点変異によりこの抑制活性が阻害されることからDokはSrcによる細胞の癌化をそのPTB領域を利用して抑制できることが示唆された(バルチモアらとの共同研究)。2) in situ hybridization法により血球系細胞と軟骨細胞でのdokの高い発現が認められ、少なくともリンパ球ではDok蛋白質の高い発現も確認された。そこでBCR刺激後のDokのチロシンリン酸化について検討したところ、Dokは抗IgM抗体による刺激後二分以内に極めて強くリン酸化された。また、BCR/FcgRIIBを同時に刺激すると、Dokのチロシンリン酸化がさらに亢進した。BCR/FcgRIIB刺激ではDok欠損によりB細胞の増殖能が回復したが、BCR単独刺激ではDokの有無によらず同程度の増殖を示した(成内らとの共同研究)。このことから、DokはFcgRIIBを介する増殖抑制の情報伝達に必須の分子と考えられた3) Dokの細胞接着刺激によるチロシンリン酸化について検討したところ、ファイブロネクチンやポリ-L-リジンの刺激により強くリン酸化された。しかし、これらの細胞接着刺激によるDokのチロシンリン酸化がSrc欠損細胞では極端に低下していることから、細胞接着刺激によりSroがDokをリン酸化することが示唆された(野口、的崎、春日らとの共同研究)。

In cancer cells of chronic osteoblastic leukemia, there is a strong correlation between protein and p62, and there is a diversity of protein and matrix. The representative of the group is p62, PH and PTB. This year, Dok's function analysis was completed. 1)The activity of Src was inhibited by about a quarter of the activity of Dok. The PTB domain is introduced into the cell, and the inhibitory activity is inhibited. The PTB domain is utilized to inhibit the carcinogenesis of cells. 2)In situ hybridization method, the high level of Dok protein in hematopoietic cells and chondrocytes was identified. Dok anti-IgM antibody was detected within two minutes after stimulation. BCR/FcRIIB is stimulated simultaneously, and Dok is stimulated simultaneously. BCR/FcgRIIB stimulation showed that the proliferation of B cells could be restored without Dok damage, while BCR alone stimulation showed the proliferation of B cells with or without Dok (joint study of Neiuchi). 3) Dok's cellular stimulation is a process for determining the molecular level of the information required to inhibit proliferation mediated by FcRIIB. Dok's cell cycle acidification due to cell cycle stimulation is extremely low and cell cycle stimulation due to Sro's Dok's cell cycle acidification due to cell cycle stimulation is extremely low.(Joint study of Noguchi, Nishizaki and Kasugawa)