免疫シグナル伝達におけるrasGAP結合蛋白質Dok及びDok-2の機能解析

rasGAP结合蛋白Dok和Dok-2在免疫信号转导中的功能分析

• 批准号: 12051211
• 负责人: 山梨 裕司
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12051211/
• 关键词: Dok; Dok-2; rasGAP; B細胞受容体; チロシンキナーゼ; FcγRIIB

免疫シグナル伝達に必須のチロシンキナーゼは、受容体分子の細胞内領域やLAT、BLNK等のドッキング蛋白質をリン酸化することでSH2やPTBを持つ分子をリクルートする。研究代表者らが発見したDokは、様々な免疫シグナル伝達系でチロシンリン酸化され、rasGAPと会合するドッキング蛋白質である。前年度までの研究から、我々はDokがB細胞の増殖とMAPキナーゼに抑制性のシグナル分子であることを発見した。そこで、本年度はDokの作用機序の解析と、Dokファミリーの蛋白質であるDok-2のノックアウトマウスの樹立と解析を実行し、以下の知見を得た。1.Dok類縁のIRS-1は、PTBドメインを介してその制御因子であるインスリン受容体と連絡する。そこで、Dok PTBドメインの標的配列をペプチドライブラリーを用いて検討し、Y/MxxNxLpYが至適な標的配列であることを突き止めた。最近、抑制性の受容体であるFcγRIIBと結合したSHIPがDokをリクルートすると報告されたが、実際、SHIP上のC-端に近いチロシンリン酸化部位周辺の配列はこの至適配列と一致した。現在、この配列とDok PTBとの会合について検討している。また、Dok下流の分子に関しては、Dokと会合する約100kDの蛋白質を精製したが、質量分析結果、未知の分子であることが分かり、現在、この分子の同定を進めている。2.Dok-2ノックアウトマウスは計画通り本年度初頭に誕生した。少なくとも、生後7ヶ月までは見かけ上は異常なく成長した。また、Dok/Dok-2二重欠損マウスに関しても、生後6ヶ月までは見かけ上は異常なく成長した。両者とも、8週齢での血液細胞の構成にも異常は認められなかったが、6ヶ月齢ノックアウトマウスにはリンパ組織の過形成が多く認められた。現在、この過形成の成因についてより詳しい解析を進めている。

Immune シ グ ナ ル 伝 must reach に の チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ は, field in the molecular の let body cells や LAT, BLNK の ド ッ キ ン グ protein を リ ン acidification す る こ と で SH2 や PTB を hold つ molecular を リ ク ル ー ト す る. Research representatives ら が 発 see し た Dok は, others 々 な immune シ グ ナ ル 伝 da system で チ ロ シ ン リ ン acidification さ れ, rasGAP meet と す る ド ッ キ ン グ protein で あ る. Before the annual ま で の research か ら, I 々 は Dok が B cells の raised colonization と MAP キ ナ ー ゼ に inhibitory の シ グ ナ ル molecular で あ る こ と を 発 see し た. そ こ で, this year's は Dok の machine sequence analytical と の, Dok フ ァ ミ リ ー の protein で あ る Dok - 2 の ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス の set と parsing を line be し, see the following の know を た. 1.Dok class, <s:1> IRS-1 を, PTB, ドメ <s:1> を を, <s:1> てそ, <s:1>, control factor である, <s:1> スリ, スリ, と, receptor と, する. そ こ で, Dok PTB ド メ イ ン の mark with column を ペ プ チ ド ラ イ ブ ラ リ ー を with い て beg し 検, Y/MxxNxLpY が to optimum な mark with column で あ る こ と を tu き check め た. Recently, inhibitory の let body で あ る Fc gamma RIIB と combining し た SHIP が Dok を リ ク ル ー ト す る と report さ れ た が, be interstate, SHIP の C - end に nearly い チ ロ シ ン リ ン acidification parts weeks 辺 の match column は こ の to adapter column と consistent し た. Now, the <s:1> <s:1> is paired with the とDok PTBと <s:1> to join the に て検 て検 て検 て検 to discuss the て る る る る. ま た, Dok obscene の molecular に masato し て は, Dok meet と す る about 100 kd protein の を refined し た が, quality analysis results, the unknown の molecular で あ る こ と が points か り, now, こ の の molecules with fixed を into め て い る. 2.Dok-2ノッ アウト アウト ウス ウス plan pass に was born at the beginning of this year に た. At なくと なくと and 7ヶ months after birth, まで まで are found to have an abnormal なく growth and た た on け. Youdaoplaceholder0, Dok/ DOK-2 double underloss また ウスに threshold て て, 6 months after birth まで まで た abnormal なく growth た on け け observed. Who struck と も, 8 weeks 齢 で の blood cells の に も abnormal は recognize め ら れ な か っ た が, 6 ヶ 齢 ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス に は リ ン パ organization have の form が く more know め ら れ た. Now, the causes of the formation of に, に, てよ, てよ, and detailed analysis of を enter めて, る, る.

项目成果

Zhou Songyang: "Domain-dependent function of the rasGAP binding protein p62^<dok> in cell signaling."Journal of Biological Chemistry. (印刷中). (2001)

周松阳：“rasGAP 结合蛋白 p62^<dok> 在细胞信号传导中的结构域依赖性功能。”生物化学杂志（2001 年出版）。

Yuji Yamanashi: "Role of the rasGAP-associated docking protein p62^<dok> in negative regulation of B cell receptor-mediated signaling."Genes & Developments. 14. 11-16 (2000)

Yuji Yamanashi：“rasGAP 相关对接蛋白 p62^<dok> 在 B 细胞受体介导的信号传导负向调节中的作用。”基因