权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

B細胞抗原受容体を介した細胞内情報伝達と免疫寛容の分子機構

B细胞抗原受体介导的细胞内信号转导和免疫耐受的分子机制

基本信息

批准号：
06265207
负责人：
山梨裕司
金额：
$ 1.92万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06265207/
关键词：
チロシンキナーゼ遺伝子欠損マウス Src lgn HS1

项目摘要

1.抗原受容体刺激直後にチロシリン酸化される主要な基質として、転写因子様配列、核移行シグナル様の配列、ならびにSH3配列を有する蛋白質p75^<HS1>を固定した。p75^<HS1>は渡辺らが樹立したHS1欠損マウスの解析から、Bリンパ球のApoptosisに関わることが明らかとなっており、そのリン酸化機構を解析することは重要である。そこで、B細胞抗体受容体に会合するLynやSykをp75^<HS1>と共にCV1細胞で高発現させた。その結果p75^<HS1>のリン酸化は、LynあるいはSyk単独では殆ど起こらず、LynとSyk共存下で、起こることが明らかとなった。そしてp75^<HS1>の2つのチロシン残基(Y378とY397)が、これらキナーゼによってリン酸化される部位であることを、Y378FならびにY397F変異体や両チロシン残基を含む配列を欠失する変異体を作成することによって示した。更に、CVI細胞での高発現系を用いて、リン酸化に伴うp75^<HS1>の局在の変化を調べ、非リン酸化状態のp75^<HS1>が細胞質に局在するのに対し、LynとSykの協調によりリン酸化されたp75^<HS1>は核に移行しうることを示した。従ってB細胞に於て抗原受容対刺激に伴い、p75^<HS1>はチロシンリン酸化され、少なくともその一部は核に移行して、Apoptosis等の生理機能に関与すると考えられる。2.lyn遺伝子欠損マウス樹立のためにゲノム解析のlyn遺伝子の単離を試み、その過程でlyn遺伝子が少なくとも2コピー存在することを明らかにした。hnRNAを鋳型としたRT-PCR法、およびそれぞれのコピーのエクソンの塩基配列とcDNAの塩基配列の比較により、このうちの一つが転写される機能lyn遺伝子であることを示した。次いで機能lyn遺伝子のエクソン3にneo遺伝子を組み込んだターゲティングベクターを構築し、ES細胞内での相同組み換えを経て、lyn遺伝子をホモに欠損するマウスを作成した。得られたlyn遺伝子欠損マウスは、外見上の発達成育及び行動に特に異常を呈していない。脾臓B細胞ではsIgM架橋による細胞内蛋白質のチロシンリン酸化に著しい減弱が見られた。今後更に、B細胞の増殖能、Apoptosisi反応等についてlyn欠損マウスを用いて解析を行う予定である。

1. Protein p75 is immobilized in the matrix, transcription factor, nuclear migration factor, and SH3 alignment after antigen <HS1>stimulation p75^<HS1>Lyn Syk p75 and <HS1>CV1 cells are highly expressed. P75 <HS1>^ The <HS1>two residues (Y378 and Y397) of p75 were found to be related to the position of the amino acid residue, Y378F and Y397F. In addition, CVI cells express high levels of protein in the form of p75, <HS1>p75, <HS1>p75<HS1>B cells are associated with antigen tolerance stimulation, p75, and <HS1>some physiological functions such as nuclear migration and Apoptosis. 2. Lyn's loss is caused by the loss of the Lyn's identity. 2. Lyn's identity is caused by the loss of the Lyn's identity. hnRNA gene typing and RT-PCR method, the comparison of gene base alignment and cDNA gene base alignment, the comparison of gene base alignment and cDNA gene base alignment, the function of lyn gene, and the comparison of gene base alignment and cDNA base alignment. In addition, the function of lyn gene is to construct the same group of genes in ES cells, and to create the same group of genes in ES cells. In addition, the development and operation of the company are abnormal. B cells in the spleen are not immune to sIgM bridging, and the intracellular protein metabolism is weakened. In the future, B cell proliferation, Apoptosisi reverse, etc. will be determined.