B細胞抗原受容体を介した細胞内情報伝達と免疫寛容の分子機構

B细胞抗原受体介导的细胞内信号转导和免疫耐受的分子机制

• 批准号: 05272206
• 负责人: 山梨 裕司
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05272206/
• 关键词: チロシンキナーゼ; トランスジェニックマウス; 遺伝子欠損マウス; SVC; lyn; HS1

1.WEHI-231細胞のアポトーシスに対するLynキナーゼの関与について知る為に、IPTGの添加により発現が抑制されるオペレーター・プロモーターの下流に活性化型lyn cDNAを組み込んだ。しかしながら、IPTG添加のみのWEHI-231細胞に対する影響を調べたところ弱いながらも増殖阻害活性のあることが判明し、現在至適条件の検討を行っている。また、WEHI-231細胞に無害と思われるテトラサイクリンにより発現抑制の可能な系も併せて検討している。2.野性型・活性化型lyn cDNAを免疫グロブリンエンハンサー、SV40プロモーターの制御下で発現するトランスジェニックマウスに関しては、一部にウイルスの感染が認められた為、帝王切開によるSPF化を行い、少なくとも一系統ずつのSPFトランスジェニックマウスを樹立し解析を続けている。3.lyn遺伝子欠損マウス樹立の為にマウスlyn遺伝子の単離を行ったところ、ゲノム上のlyn遺伝子に対応する領域として、塩基配列上極めて相同性の高い二つの領域が見い出された。また、両領域を識別し得るプライマーを用いてB細胞のhnRNAに対するRT-PCRを行い、転写活性のあるlyn遺伝子を同定した。すでに、lyn遺伝子のエクソン2-4を含むゲノムDNAを用いて遺伝子破壊ベクターを構築し、ES細胞に導入している。4.B細胞受容体刺激直後にチロシンリン酸化される蛋白質の同定に関しては、6.4×10^9個のヒトDaudi B細胞から抗フォスフォチロシン抗体を用いて精製された75kd蛋白質の部分アミノ酸配列を決定し、血球系細胞特異的に発現する細胞内蛋白質HS1がB細胞受容体刺激直後に最も強くチロシンリン酸化される分子であることを発見した。

1. WEHI-231 cells were isolated from Lyn cells by IPTG, and the expression of Lyn cDNA was inhibited by IPTG. The effects of IPTG addition on WEHI-231 cells were investigated. WEHI-231 cells are harmless and may be inhibited by detection. 2. Wild and active lyn cDNA are immune to infection, and some of them are infected with SPF. The virus is isolated from the host cells and isolated from the host cells. 3. Lyn heritage loss is established as a result of the separation of Lyn heritage from other regions, and the similarity of Lyn heritage to other regions is high. To identify the domain, we need to use the hnRNA of B cells to determine the activity of the lyn gene. 2-4 of the Lyn gene was introduced into the ES cells. 4. The protein identity of 6.4×10^9 Daudi B cells was determined after stimulation of B cells by volume. The protein identity of Daudi B cells was determined by purification of 75kd protein. Cell line-specific expression of the intracellular protein HS1 in B cells is the most potent expression of the protein after stimulation.

项目成果

Yuji Yamanashi: "Activation of src-like protein-tyrosive kinase Lyn and its assucintion with phospha tidylinositsl-3 kinase upon β cell antigen receptor-mediated signalisy." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 89. 1118-1122 (1992)

Yuji Yamanashi：“src 样蛋白酪氨酸激酶 Lyn 的激活及其与 β 细胞抗原受体介导的信号传导的磷酸 tidylinositsl-3 激酶的关联。”Proc.Natl.Acad.Sci.USA。 ）

Yuji Yamanashi: "Association of β cell antigen receptor with a protein-tyrosiac kinase Lyn." Science. 251. 192-194 (1991)

Yuji Yamanashi：“β 细胞抗原受体与蛋白质酪氨酸激酶 Lyn 的关联。科学”251。192-194（1991）

Yuji Yamanashi: "Identification of HS1 protein as a mejor substrate of protein-tyrosiac kinase(s) upon β cell antigen receptor-mediated signalisy." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 90. 3631-3635 (1993)

Yuji Yamanashi：“鉴定 HS1 蛋白是 β 细胞抗原受体介导的信号传递中的蛋白酪氨酸激酶的主要底物。”Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90. 3631-3635 (1993)