がん細胞の接着が誘発する血管内皮細胞間隙の開裂に関わるシグナル伝達分子の探索

寻找参与癌细胞粘附诱导的血管内皮细胞间隙裂解的信号分子

基本信息

批准号：
10152237
负责人：
田中稔之
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

【1】キメラCD44を用いた新しい接着シグナルの検出系の確立とCD44の機能的エピトープの解析:CD44の細胞内領域にFasのdeath domainを含む細胞内領域を連結したキメラ分子をCD44を発現しないAKR-1細胞に遺伝子導入し、CD44の接着シグナルを細胞死へ変換する新しい検出系を確立した。この検出系とCD44の異なるエピトープに対する単クローン抗体(mAb)を用いて、CD44のシグナル形成に関与する細胞外領域の特定を試みた。その結果、LyS49を含むCD44のヒアルロン酸結合に関連するエピトープを認識するmAbおよびPro108/Thr113を含むエピトープに対するmAbにアポトーシス誘導活性が認められた。【2】血管内皮細胞に発現しtransmigrationを制御する信号伝達分子の検索:リンパ節の高内皮細静脈(HEV)はその表面に接着した細胞を高率にtransmigrateさせる特徴をもつ。そこで、精製したHEVから3′末端特異的cDNAライブラリを作製し、各々約1,500クローンの塩基配列(gene、signature:GS)の決定とGSの出現頻度解析を通じてHEVの「遺伝子発現プロフィル」を得た。また、CD31^+内皮細胞やリンパ球を含む他のライブラリの解析リストとの比較およびデータベース検索を通じてHEV特異的遺伝子の探索を試みた。その結果、HEVにはendoglinやCD34などの既知の内皮細胞マーカーに加え、炎症反応に関連する遺伝子などの発現が認めれられた。またHEVに選択的に検出された既知遺伝子のうち、出現頻度の高いmac25/TAFについてin situハイブリダイゼーションを行ったところ、HEVに選択的にシグナルが検出された。

[1]使用嵌合CD44建立了新的粘附信号检测系统，并分析CD44的功能表位：一种嵌合分子，该嵌合分子在CD44的细胞内中包含FAS死亡结构域连接的嵌合分子转染了CD44的AKR-1细胞中未表达CD44的AKR-1细胞，并将其建立了一个转换为CDECTECTION的ADS ADES AD HEAD IS AD HEADENTION。使用此检测系统和与CD44不同表位的单克隆抗体（mAb），我们试图识别CD44信号传导所涉及的细胞外区域。结果，在识别与含有lys49的CD44和含有含有Pro108/thr113的表位的CD44的透明质酸结合有关的表位的mAB中观察到了凋亡诱导活性。 [2]搜索表达和调节血管内皮细胞转移的信号分子：淋巴结的高内皮静脉（HEV）的特征是以高速率粘附在其表面上的传播细胞。因此，通过纯化的HEV制备了3'最终特异性cDNA文库，并通过确定大约1,500个克隆的基础序列（基因，签名：GS）获得HEV的“基因表达谱”，并对GS的出现频率进行分析。我们还试图通过与其他文库的分析列表进行比较来搜索HEV特异性基因，包括CD31^+内皮细胞，淋巴细胞和数据库搜索。结果，除了已知的内皮细胞标记物（例如内og和CD34）外，还发现HEV表达了与炎症反应有关的基因。此外，在HEV中选择性检测到的已知基因中，MAC25/TAF发生了高频率，该基因受到原位杂交的影响，并且在HEV中选择性检测到了信号。