白血球特異的パキシリン様蛋白質リューパキシンによる造血系腫瘍細胞の運動制御

白细胞特异性桩蛋白样蛋白 leupaxin 对造血肿瘤细胞运动的控制

基本信息

批准号：
12215093
负责人：
田中稔之
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

接着班に濃縮して存在する多機能性アダプター分子・パキシリンと相同のドメイン構造をもち、白血球特異的に発現するleupaxinの造血系腫瘍細胞の接着と運動制御における機能的な役割を明らかにすることを目的として以下の解析を行った。【1】leupaxinの細胞内局在の解析leupaxinは、パキシリンと類似のドメイン構造を示すことから、造血系細胞の接着レセプターの裏打ち構造の構築に関与することが予想された。EGFP融合蛋白質を用いて造血系腫瘍細胞における細胞内分布を解析した結果、leupaxinはアクチン繊維に富む細胞表層部に選択的に分布することが明らかになった。【2】leupaxinと会合する分子の検索パキシリンはチロシンキナーゼFAKとの会合を通じて細胞の接着および運動の制御に重要な役割はたすと考えられている。マウス胸腺腫細胞BW5147を用いて、leupaxinと会合する分子を免疫沈降法により検索した結果、leupaxinはFAKと相同性の高いチロシンキナーゼPyk2と会合することが認められた。【3】leupaxinのシグナル伝達への関与leupaxinとEGFPの融合蛋白質を293T細胞に一過性に過剰発現させ、固相化したフィブロネクチンへの接着依存性に誘導されるパキシリンのチロシンリン酸化に対する影響を解析した。その結果、leupaxinを過剰発現させた293T細胞では、フィブロネクチンへの接着によるインテグリン依存性のパキシリンのチロシンリン酸化が対照群に比して減弱していることが示された。以上の結果より、leupaxinはパキシリンのチロシンリン酸化を介するシグナル伝達に対して抑制的に作用することが示唆された。

进行了以下分析，以阐明Leupaxin的功能作用，Leupaxin是一种与多功能钠分子Paxilin同源的结构域结构，该结构集中在粘附浆中，并在白细胞中特异性表达，在象征性肿瘤细胞的粘附和运动控制中。 [1]由于liupaxin表现出类似于paxillin的结构，对余素的亚细胞定位分析，可以预测它将参与造血细胞粘附受体的替代结构的构建。使用EGFP融合蛋白对造血肿瘤细胞中细胞内分布的分析表明，liupaxin选择性分布在细胞的表面层中，该细胞富含肌动蛋白纤维。 [2]搜索与liupaxin paxillin相关的分子被认为在调节细胞粘附和运动性通过与酪氨酸激酶FAK的结合中具有重要作用。使用小鼠胸腺瘤细胞BW5147，通过免疫沉淀搜索与lupaxin相关的分子，发现liupaxin与酪氨酸激酶Pyk2相关，这与FAK高度同源。 [3]在293T细胞中暂时过表达了余生型和EGFP的融合蛋白，并且分析了帕克林蛋白对粘附依赖性诱导的酪氨酸磷酸化的影响，分析了固定纤维蛋白的粘附依赖性。结果表明，过度表达余素的293T细胞表明，与对照组相比，由于对纤连蛋白的粘附而导致的整联蛋白依赖性酪氨酸磷酸化被减弱。上述结果表明，liupaxin对帕克西林酪氨酸磷酸化介导的信号转导作用。