がん細胞がTGF-βの増殖抑制活性に対する応答性を失う責任異常分子の同定

鉴定导致癌细胞失去对 TGF-β 抗增殖活性反应性的异常分子

• 批准号: 10152261
• 负责人: 加藤 光保
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Japanese Foundation For Cancer Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10152261/
• 关键词: 角化細胞; 扁平上皮癌; transforming growth factor-β; SMAD; 増殖抑制; 浸潤

1.扁平上皮癌浸潤モデルの確立:コラーゲンゲルを用いた3次元培養法により、扁平上皮癌細胞がコラーゲンゲル内への浸潤性増殖を示す培養実験系を確立した。2.変異SMAD(Smad3D407E)によるTGF-βシグナルの抑制二大腸癌でSmad2に見つけられた変異と相同な変異を導入したSmad3D407EはSMADを介するTGF-βシグナルに優性抑制的に作用した。また、この変異Smad3を角化細胞株HaCaTに発現させると、TGF-βによる増殖抑制作用に抵抗性となった。さらに、このTGF-βに抵抗性を獲得した角化細胞を3次元培養で解析したところ、浸潤性増殖能を獲得していた。3.がんにおけるTGF-βシグナルの異常:甲状腺乳頭癌の免疫組織化学的検索により、TGF-βの染色性が高い症例は転移が多いことが示された。4.TGF-β特異型SMAD; Smad2とSmad3の機能解析:Smad2Δexon3というスプライス変異体を見つけた。Smad3によって発現が強く誘導されるp3TP-luxをレポーターとした場合、この変異体はSmad3と同等の発現誘導能を示した。このプロモーター領域にはSmad3は結合できるがSmad2は結合できない配列があるが、Smad2Δexon3はこの配列に結合し、exon3によってコードされた30アミノ酸がSmad2とSmad3のDNA結合能の違いを決めていた。また、角化細胞株HaCaTにおいて、TGF-βはSmad2とSmad3の両者を強く活性化したが、アクチビンは主にSmad3を活性化した。5TGF-βシグナルの標的遺伝子:TGF-βによる角化細胞の増殖抑制においてc-mycがSMADの標的遺伝子になっていた。また角化細胞におけるTGF-βの初期応答遺伝子のcDNA配列を決定した。この遺伝子は分子量19kDa、等電点10.9の新規塩基性核蛋白をコードしていた。

1. Squamous cell carcinoma infiltrating モ デ ル の established: コ ラ ー ゲ ン ゲ ル を with い た three yuan culture method に よ り, squamous cell cancer cells が コ ラ ー ゲ ン ゲ ル within へ の invasive raised colonization を shown す training be を 験 department establish し た. 2. - different SMAD (Smad3D407E) に よ る TGF - beta シ グ ナ ル の inhibit colorectal cancer 2 で Smad2 に see つ け ら れ た - different と same な - different を import し た Smad3D407E は SMAD を interface す る TGF - beta シ グ ナ ル に optimal inhibition role in に し た. ま た, こ の - different Smad3 を keratinization cell line HaCaT に 発 now さ せ る と, TGF - beta に よ inhibition に る raised colonization resistance と な っ た. さ ら に, こ の TGF - beta に resistance を し た keratinocytes を three yuan culture で parsing し た と こ ろ, invasive raised colonization can get し を て い た. 3. が ん に お け る TGF - beta シ グ ナ ル の exception: thyroid papillary carcinoma の immunohistochemical 検 cable に よ り, TGF - beta の dyeing が cases high い は planning move more than が い こ と が shown さ れ た. 4.TGF-β specific type SMAD; Smad2とSmad3 <s:1> function analysis :Smad2Δexon3と うスプラ うスプラ ス variant を see けた けた けた. Smad3 に よ っ て 発 now strong が く induced さ れ る p3TP - lux を レ ポ ー タ ー と し た occasions, こ の - variant は Smad3 と equal の 発 now can induce を shown し た. こ の プ ロ モ ー タ ー field に は Smad3 は combining で き る が Smad2 は combining で き な い match column が あ る が, Smad2 Δ exon3 は こ の match column に し, exon3 に よ っ て コ ー ド さ れ た 30 ア ミ ノ acid が Smad2 と Smad3 の DNA binding energy の violations い を definitely め て い た. ま た, horn cell line HaCaT に お い て, TGF - beta は Smad2 と Smad3 の struck the strong を く activeness し た が, ア ク チ ビ ン は main に Smad3 を activeness し た. 5 TGF - beta シ グ ナ ル の mark heritage 伝 son: TGF - beta に よ る keratinocytes の raised colonization inhibit に お い て c - myc が SMAD の mark heritage 伝 son に な っ て い た. Youdaoplaceholder0 keratinocytes におけるTGF-β <s:1> initial 応 response 伝 plasmid cDNA coordination を determines た た. The <s:1> cultural heritage 伝 molecule 伝 has a molecular weight of 19kDa and an isoelectric point of 10.9. According to the new regulations, it is a basic nucleoprotein をコ ド ド て た た.

项目成果

Mita,T.et al.: "Expression of transforming growth factor β superfamily and their receptors in the corneal stromal wound healing process after excimer laser keratectomy." British Journal of Ophthalmology. 82. 462-463 (1998)

Mita, T. 等人：“准分子激光角膜切除术后角膜基质伤口愈合过程中转化生长因子 β 超家族及其受体的表达。”82. 462-463 (1998)。

Goto,D.et al.: "A single missense mutant of Smad3 inhibits activation of both Smad2 and Smad3, and has a dominant negative effect on TGF-β signals." FEBS letters. 430. 201-204 (1998)

Goto, D. 等人：“Smad3 的单个错义突变体会抑制 Smad2 和 Smad3 的激活，并对 TGF-β 信号产生显着的负面影响。”430. FEBS 字母。

Mita,T.et al.: "Effects of transforming growth factor β on corneal epithelial and stromal cell function in a rat wound healing model after excimer laser keratectomy." Graefe's Arch.Clin.Exp.Ophthalmol.236. 834-843 (1998)

Mita, T. 等人：“准分子激光角膜切除术后大鼠伤口愈合模型中转化生长因子 β 对角膜上皮和基质细胞功能的影响。Graefes Arch.Clin.Exp.Olookingmol.234-843 (1998) ）