がん細胞がTGF-βの増殖抑制活性に対する応答性を失う責任異常分子の同定

鉴定导致癌细胞失去对 TGF-β 抗增殖活性反应性的异常分子

• 批准号: 10152261
• 负责人: 加藤 光保
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Japanese Foundation For Cancer Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10152261/
• 关键词: 角化細胞; 扁平上皮癌; transforming growth factor-β; SMAD; 増殖抑制; 浸潤

1.扁平上皮癌浸潤モデルの確立:コラーゲンゲルを用いた3次元培養法により、扁平上皮癌細胞がコラーゲンゲル内への浸潤性増殖を示す培養実験系を確立した。2.変異SMAD(Smad3D407E)によるTGF-βシグナルの抑制二大腸癌でSmad2に見つけられた変異と相同な変異を導入したSmad3D407EはSMADを介するTGF-βシグナルに優性抑制的に作用した。また、この変異Smad3を角化細胞株HaCaTに発現させると、TGF-βによる増殖抑制作用に抵抗性となった。さらに、このTGF-βに抵抗性を獲得した角化細胞を3次元培養で解析したところ、浸潤性増殖能を獲得していた。3.がんにおけるTGF-βシグナルの異常:甲状腺乳頭癌の免疫組織化学的検索により、TGF-βの染色性が高い症例は転移が多いことが示された。4.TGF-β特異型SMAD; Smad2とSmad3の機能解析:Smad2Δexon3というスプライス変異体を見つけた。Smad3によって発現が強く誘導されるp3TP-luxをレポーターとした場合、この変異体はSmad3と同等の発現誘導能を示した。このプロモーター領域にはSmad3は結合できるがSmad2は結合できない配列があるが、Smad2Δexon3はこの配列に結合し、exon3によってコードされた30アミノ酸がSmad2とSmad3のDNA結合能の違いを決めていた。また、角化細胞株HaCaTにおいて、TGF-βはSmad2とSmad3の両者を強く活性化したが、アクチビンは主にSmad3を活性化した。5TGF-βシグナルの標的遺伝子:TGF-βによる角化細胞の増殖抑制においてc-mycがSMADの標的遺伝子になっていた。また角化細胞におけるTGF-βの初期応答遺伝子のcDNA配列を決定した。この遺伝子は分子量19kDa、等電点10.9の新規塩基性核蛋白をコードしていた。

1. Establishment of squamous cell carcinoma invasion: establishment of squamous cell carcinoma invasion culture system using three-dimensional culture method 2. Different SMAD(Smad3D 407E) can inhibit the growth of two colorectal cancer cells. Smad2 can inhibit the growth of two colorectal cancer cells by introducing different SMAD into Smad3D 407E. The growth inhibition of keratinized cell line HaCaT is resistant to TGF-β. In addition, TGF-β resistance was obtained by three-dimensional culture of keratinized cells. 3. TGF-β staining was detected by immunohistochemistry in papillary thyroid carcinoma. 4. Function analysis of TGF-β specific SMAD; Smad2 and Smad3:Smad2Δexon3 and Smad 2Δexon3. Smad3 is a strong induction factor, and p3TP-lux is a strong induction factor. The DNA binding energy of Smad2 and Smad 3 is determined by the DNA binding energy of Smad 3 and Smad 2. The keratinized cell line HaCaT is activated by TGF-β and Smad2 and Smad3. 5TGF-β gene target gene:TGF-β gene target gene for keratinocyte proliferation inhibition The cDNA alignment of TGF-β in keratinized cells was determined. The protein has a molecular weight of 19kDa and an isoelectric point of 10.9.

项目成果

Mita,T.et al.: "Expression of transforming growth factor β superfamily and their receptors in the corneal stromal wound healing process after excimer laser keratectomy." British Journal of Ophthalmology. 82. 462-463 (1998)

Mita, T. 等人：“准分子激光角膜切除术后角膜基质伤口愈合过程中转化生长因子 β 超家族及其受体的表达。”82. 462-463 (1998)。

Goto,D.et al.: "A single missense mutant of Smad3 inhibits activation of both Smad2 and Smad3, and has a dominant negative effect on TGF-β signals." FEBS letters. 430. 201-204 (1998)

Goto, D. 等人：“Smad3 的单个错义突变体会抑制 Smad2 和 Smad3 的激活，并对 TGF-β 信号产生显着的负面影响。”430. FEBS 字母。

Mita,T.et al.: "Effects of transforming growth factor β on corneal epithelial and stromal cell function in a rat wound healing model after excimer laser keratectomy." Graefe's Arch.Clin.Exp.Ophthalmol.236. 834-843 (1998)

Mita, T. 等人：“准分子激光角膜切除术后大鼠伤口愈合模型中转化生长因子 β 对角膜上皮和基质细胞功能的影响。Graefes Arch.Clin.Exp.Olookingmol.234-843 (1998) ）